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公开(公告)号：CN112680393B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202110053059.7
申请日：2021-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种能提高生产效率的无菌毛大肠杆菌的构建及应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上菌毛基因簇的64个基因得到突变菌WQM026，该菌株在营养缺乏的培养基中生长变快，菌体总量增多。将PHB和L‑苏氨酸合成的相关基因分别转化到菌株WQM026中，得到的重组菌WQM026/pBHR68和WQM026/pFW01‑thrA*BC‑rhtC可以分别高效合成PHB和L‑苏氨酸。合成的PHB占细胞干重的87.87％，是野生型对照菌的3.44倍。L‑苏氨酸产量为2.49g/L，是野生型对照菌的3.66倍。
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公开(公告)号：CN112575041A
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201910942722.1
申请日：2019-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种混合碳源高效发酵生产PHB的工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌中敲除敲除大肠杆菌基因组上核心糖基因簇的14个基因得到突变菌WJW01，继续敲除大肠杆菌基因组上O‑抗原基因簇的11个基因得到突变菌WJW02，随后将PHB合成的三个基因分别转化到精简菌株WJW02中，并敲除了ptsG基因，使构建的重组菌可以利用木糖和葡萄糖混合碳源合成PHB高达细胞干重的78.4％，是野生型对照菌W3110/pDXW‑8‑phaCAB(1.5％)的6倍，且较WJW02/pDXW‑8‑phaCAB提高50％。
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公开(公告)号：CN110373372B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910703169.6
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除LPS合成基因簇高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明在大肠杆菌中敲除敲除大肠杆菌基因组上核心糖基因簇的14个基因得到突变菌WJW01，继续敲除大肠杆菌基因组上O‑抗原基因簇的11个基因得到突变菌WJW02，随后将PHB合成的三个基因分别转化到精简菌株WJW01和WJW02中，得到的重组菌WJW01/pBHR68和WJW02/pBHR68分别可以合成PHB高达细胞干重的80.6％和82.0％，是野生型对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的53.7和54.7倍。
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公开(公告)号：CN110387346A
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201910701830.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明采用CRISPR/Cas9敲除系统敲除大肠杆菌W3110基因组上负责胞外多糖合成和转运的21个基因得到突变菌WJW09，采用WJW09菌株为宿主菌，利用pBHR68异源表达PHB合成基因簇phaCAB，WJW09/pBHR68合成PHB可以达到细胞干重的57.2％，而W3110/pBHR68合成的PHB仅占细胞干重的1.5％。重组菌WJW09/pBHR68的PHB体积产量高达对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的38倍。
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公开(公告)号：CN106086056B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610415109.0
申请日：2016-06-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统，属于微生物基因工程领域。本发明的恶臭假单胞菌基因敲除系统和基因组精简系统巧妙结合了自杀质粒敲除系统和位点特异性重组系统，大大提高了二轮筛选正确率，高达90％以上，在用于长达69个基因的基因簇的敲除时仍然表现出90％以上正确率。本发明实现基因簇的连续敲除，操作简便，高效，正确率高，成本低。本发明为精简优化恶臭假单胞菌基因组奠定了分子基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103484489B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310438191.5
申请日：2013-09-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了两种pH作用范围拓宽的谷氨酸脱羧酶突变体，其DNA序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3，氨基酸序列分别为SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.4。本发明结合随机突变（易错PCR）技术和DNA定点突变技术，对野生型谷氨酸脱羧酶GadB1编码基因进行分子改造，得到了两种突变酶GadB1T17I/D294G/Q346H和GadB1T17I/D294G/E312S/Q346H，相对野生酶其有效pH作用范围得到一定的扩展，尤其在偏中性pH条件下仍具有较好的活性。随着有效pH作用范围的拓宽，突变酶在pH5.5～6.5条件下，仍然具有较高的催化活性，因此解决了谷氨酸脱羧酶催化GABA生物合成时，在pH5.5～6.5时，催化能力低的问题，为利用该酶及其编码基因来生物合成GABA创造好的条件。
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公开(公告)号：CN104844665A
公开(公告)日：2015-08-19
申请号：CN201510282822.8
申请日：2015-05-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种低毒含五条脂肪酸链的Kdo2-单磷酸类脂A的制备与应用，属于生物工程领域。本发明改造大肠杆菌，合成了一种具有特殊结构、低毒的、五链Kdo2-单磷酸类脂A，这种Kdo2-类脂A分子不连有核心多糖长链、仅由两个2-酮-3-脱氧辛酸、五条脂肪酸链和C4’位单个磷酸构成。该Kdo2-类脂A具有双亲性质，便于分离提取和纯化，能够被实施检测和直接鉴定，且保持了类脂A部分的生物免疫活性，较野生型W3110的LPS也有明显的减毒作用，是极具发展潜力的疫苗佐剂。同时，本发明提供的提取和纯化该Kdo2-类脂A的方法，步骤简单明了，易于操作。
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公开(公告)号：CN104830745A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510208490.9
申请日：2015-04-28
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12R1/19 , C12N1/20 , C12N9/88 , C12N15/70 , C12P13/005 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种高效生产γ-氨基丁酸的方法，属于发酵工程领域。本发明将一种双精氨酸信号肽基因(torA)和谷氨酸脱羧酶基因(gadB)融合，并转化大肠杆菌宿主(Escherichia coli BL21(DE3))得到可以分泌表达谷氨酸脱羧酶的重组菌pET20b(+)-torA-gadB/E.coli BL21(DE3)。该菌的胞外谷氨酸脱羧酶酶活，在摇瓶水平可达5.11U/mL，在3L发酵罐水平可达15.82U/mL。利用该体系，以一水和谷氨酸钠为底物γ-氨基丁酸产量可达203.7g/L。
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公开(公告)号：CN103555779A
公开(公告)日：2014-02-05
申请号：CN201310331785.6
申请日：2013-08-01
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了利用一种发酵生产γ-氨基丁酸的方法，是将两种谷氨酸脱羧酶基因gadB1，gadB2构建共表达载体导入到谷氨酸生产菌中构建基因工程菌，利用基因工程菌表达的谷氨酸脱羧酶将其自身积累的谷氨酸脱去一个羧基合成出γ-氨基丁酸。通过对种子培养基、发酵培养基和发酵条件优化，尤其是尿素在6-24小时内间断补加，大大提高了GABA的产量和谷氨酸转化率。本发明不仅将谷氨酸的积累和GABA的合成简化为一步发酵，简化了GABA生产过程、降低了生产成本；而且后期发酵优化明显提高了GABA的产量，使得L-谷氨酸的转化率达到74%，再次验证此生产方法的可行性和优势，为工业化应用打下良好基础。
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公开(公告)号：CN103409446A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310215508.9
申请日：2013-05-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种棒状杆菌基因连续敲除系统的构建方法和应用，属于基因工程技术领域。其包括模板质粒及温敏表达质粒；所述模板质粒提供两端带有loxp或变异loxL/R位点的kan片段，又称kan盒；所述温敏表达质粒携带Cm抗性基因cat及温敏C.glutamicum复制子，表达Cre重组酶，用于去除Km抗性基因kan。本发明的棒状杆菌连续敲除系统，可普遍用于对棒状杆菌的连续的基因改造，操作简便，高效。利用该敲除系统，成功的完成对棒状杆菌三大典型亚种基因组上基因的（连续）敲除，证明该系统适用于棒状杆菌代谢产物的研究和生产。
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