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公开(公告)号：CN110387346A
公开(公告)日：2019-10-29
申请号：CN201910701830.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明采用CRISPR/Cas9敲除系统敲除大肠杆菌W3110基因组上负责胞外多糖合成和转运的21个基因得到突变菌WJW09，采用WJW09菌株为宿主菌，利用pBHR68异源表达PHB合成基因簇phaCAB，WJW09/pBHR68合成PHB可以达到细胞干重的57.2％，而W3110/pBHR68合成的PHB仅占细胞干重的1.5％。重组菌WJW09/pBHR68的PHB体积产量高达对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的38倍。
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公开(公告)号：CN106086056B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610415109.0
申请日：2016-06-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统，属于微生物基因工程领域。本发明的恶臭假单胞菌基因敲除系统和基因组精简系统巧妙结合了自杀质粒敲除系统和位点特异性重组系统，大大提高了二轮筛选正确率，高达90％以上，在用于长达69个基因的基因簇的敲除时仍然表现出90％以上正确率。本发明实现基因簇的连续敲除，操作简便，高效，正确率高，成本低。本发明为精简优化恶臭假单胞菌基因组奠定了分子基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建。
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公开(公告)号：CN110669709A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910701811.7
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除鞭毛和菌毛基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE-motA，fliY-fliR和flgN-flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB-fimH得到菌毛精简菌株WJW011。随后将PHB合成的三个基因转化到菌株WJW010和WJW011中，得到重组菌WJW010/pBHR68和WJW011/pBHR68，在正常的发酵条件下即可以合成细胞干重19.2％、2.8％的PHB，PHB体积产量是野生对照菌W3110/pBHR68(2％)的9.6倍和1.4倍。
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公开(公告)号：CN106119181B
公开(公告)日：2019-09-03
申请号：CN201610512651.8
申请日：2016-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产聚羟基丁酸羟基戊酸酯的基因工程菌及其应用方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明构建的基因工程菌可利用单一碳源生产聚3‑羟基丁酸酯‑co‑3‑羟基戊酸酯(PHBV)，且3HV的摩尔分数为66％。本发明解决了PHBV生产中辅助碳源丙酸盐的添加带来的成本过高的问题。经过130h的3L发酵罐进行补料分批发酵，本发明提供的谷氨酸棒杆菌基因工程菌在胞内可以产生占细胞干重比例为20％的PHBV，其3HV比例为66％，同时产生异亮氨酸。
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公开(公告)号：CN106119181A
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201610512651.8
申请日：2016-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产聚羟基丁酸羟基戊酸酯的基因工程菌及其应用方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明构建的基因工程菌可利用单一碳源生产聚3‑羟基丁酸酯‑co‑3‑羟基戊酸酯(PHBV)，且3HV的摩尔分数为66％。本发明解决了PHBV生产中辅助碳源丙酸盐的添加带来的成本过高的问题。经过130h的3L发酵罐进行补料分批发酵，本发明提供的谷氨酸棒杆菌基因工程菌在胞内可以产生占细胞干重比例为20％的PHBV，其3HV比例为66％，同时产生异亮氨酸。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106086056A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610415109.0
申请日：2016-06-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种恶臭假单胞菌基因敲除和基因组精简系统，属于微生物基因工程领域。本发明的恶臭假单胞菌基因敲除系统和基因组精简系统巧妙结合了自杀质粒敲除系统和位点特异性重组系统，大大提高了二轮筛选正确率，高达90％以上，在用于长达69个基因的基因簇的敲除时仍然表现出90％以上正确率。本发明实现基因簇的连续敲除，操作简便，高效，正确率高，成本低。本发明为精简优化恶臭假单胞菌基因组奠定了分子基础，有利于实现合成生物学底盘细胞的高效构建。
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公开(公告)号：CN110669709B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201910701811.7
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除鞭毛和菌毛基因高效合成PHB的方法，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除大肠杆菌基因组上三个鞭毛基因簇flhE‑motA，fliY‑fliR和flgN‑flgL得到鞭毛精简菌株WJW010，敲除菌毛基因簇fimB‑fimH得到菌毛精简菌株WJW011。随后将PHB合成的三个基因转化到菌株WJW010和WJW011中，得到重组菌WJW010/pBHR68和WJW011/pBHR68，在正常的发酵条件下即可以合成细胞干重19.2％、2.8％的PHB，PHB体积产量是野生对照菌W3110/pBHR68(2％)的9.6倍和1.4倍。
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公开(公告)号：CN105950517B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610515320.X
申请日：2016-06-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸棒杆菌及其应用，属于微生物领域。所述谷氨酸棒杆菌于2016年6月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2016303。该谷氨酸棒杆菌可在细胞内积累较多的丙酰辅酶A，较ATCC13869提高了15.8倍，可用于以丙酰辅酶A为底物的相关代谢产物的生产。当引入聚羟基脂肪酸酯合成基因后，该谷氨酸棒杆菌可以合成PHBV，但在ATCC13869中合成产物为PHB。该发明解决了外源添加丙酸盐或丙酸来生产PHBV的现状，实现了在谷氨酸棒杆菌中无外源添加丙酸或丙酸盐直接生产PHBV，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN110387347B
公开(公告)日：2021-03-02
申请号：CN201910703084.8
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株大肠杆菌膜壁精简底盘菌株及其高产PHB的应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明敲除野生型大肠杆菌W3110基因组上脂多糖的核心糖基因簇gmhD‑waaQ和O‑抗原基因簇wbbL‑rmlB，胞外多糖基因簇galF‑wza，4型荚膜多糖合成基因簇yccC‑ymcD，三个鞭毛基因簇flhE‑motA、fliY‑fliR、flgN‑flgL，和一个菌毛基因簇fimB‑fimH得到菌株WJW08，然后将PHB合成相关的基因转化到菌株中得到重组菌WJW08/pBHR68，在正常的发酵条件下该重组菌可以合成细胞干重81.9％的PHB，是野生对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的54.6倍。
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公开(公告)号：CN110387346B
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN201910701830.X
申请日：2019-07-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了缺失21个编码胞外多糖合成基因的基因工程菌及其应用，属于基因工程和发酵工程领域。本发明采用CRISPR/Cas9敲除系统敲除大肠杆菌W3110基因组上负责胞外多糖合成和转运的21个基因得到突变菌WJW09，采用WJW09菌株为宿主菌，利用pBHR68异源表达PHB合成基因簇phaCAB，WJW09/pBHR68合成PHB可以达到细胞干重的57.2％，而W3110/pBHR68合成的PHB仅占细胞干重的1.5％。重组菌WJW09/pBHR68的PHB体积产量高达对照菌W3110/pBHR68(1.5％)的38倍。
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