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公开(公告)号：CN117904072A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410024495.5
申请日：2024-01-08
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N9/14 , C12N15/55 , C12N15/70 , C07K16/40 , C07K16/06 , G01N33/577 , G01N33/573 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一株针对PRRSV解旋酶的抗原表位、单克隆抗体制备方法及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp10，利用大肠杆菌表达重组Nsp10，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗PRRSV Nsp10的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为425TDKRVVDSLR434。
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公开(公告)号：CN116555196A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310702546.0
申请日：2023-06-14
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N7/01 , C12N7/04 , C12N15/34 , C12N15/40 , C07K14/01 , C12N15/86 , A61K39/12 , A61K39/295 , A61P31/20 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株，包含猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4‑F112的基因组核酸，在该HuN4‑F112基因组的ORF1b和ORF2a之间插入有猪圆环病毒2型PCV2的Cap蛋白基因表达序列，该PCV2的Cap蛋白基因表达序列为编码SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列。本发明还公开了一种上述表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株的制备方法和应用。本发明的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株，不仅能够稳定表达PCV2的Cap蛋白，而且具有遗传稳定性，该疫苗株免疫健康仔猪后能够刺激猪体产生高水平的PCV2特异性ELISA抗体，有望成为安全有效的猪繁殖与呼吸综合征与猪圆环病毒病的二联疫苗。
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公开(公告)号：CN117904072B
公开(公告)日：2025-01-28
申请号：CN202410024495.5
申请日：2024-01-08
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N9/14 , C12N15/55 , C12N15/70 , C07K16/40 , C07K16/06 , G01N33/577 , G01N33/573 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一株针对PRRSV解旋酶的抗原表位、单克隆抗体制备方法及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp10，利用大肠杆菌表达重组Nsp10，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗PRRSV Nsp10的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为425TDKRVVDSLR434。
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公开(公告)号：CN117886906B
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202410087827.4
申请日：2024-01-22
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/18 , C07K16/10 , C12N15/13 , A61K39/187 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其应用。通过构建真核表达载体pCDNA3.4‑Erns‑strep，瞬时转染CHO细胞表达重组Erns蛋白，利用strep标签纯化重组蛋白，四次免疫Balb/C小鼠，分离小鼠脾细胞，利用FACS法分离特异性B细胞，并通过反转录和PCR获得单个B细胞抗体的可变区序列，构建重链、轻链重组表达质粒，瞬时转染CHO细胞，表达并利用Protein G纯化获得完整的抗CSFV Erns蛋白单克隆抗体，并鉴定了该抗体识别的抗原表位序列为113TCRYDKNTDVNVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSF146。
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公开(公告)号：CN118755766A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202410800950.6
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种ISG15、DDIT4和IFNAR1三基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系的构建方法和应用。本发明中，利用CRISPR/Cas9技术对永生化的猪肺泡巨噬细胞系(mPAM)依次敲除ISG15、DDIT4和I型干扰素受体基因IFNAR1，命名为mPAM‑ISG15‑/‑/IFNAR1‑/‑/DDIT4‑/‑细胞系。同时敲除ISG15、DDIT4和IFNAR1的mPAM可促进病毒的复制，显著提高病毒的滴度，而且三基因敲除后对细胞的活性无显著影响。为非洲猪瘟病毒工业化生产奠定了基础，对非洲猪瘟这一重大动物疫病的防控和生猪养殖具有重要的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117903262B
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410083824.3
申请日：2024-01-19
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/08 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7单克隆抗体的制备、表位鉴定及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp7，利用大肠杆菌表达重组Nsp7，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗Nsp7的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为184KFWDKNSGD192。
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公开(公告)号：CN117886906A
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202410087827.4
申请日：2024-01-22
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/18 , C07K16/10 , C12N15/13 , A61K39/187 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其应用。通过构建真核表达载体pCDNA3.4‑Erns‑strep，瞬时转染CHO细胞表达重组Erns蛋白，利用strep标签纯化重组蛋白，四次免疫Balb/C小鼠，分离小鼠脾细胞，利用FACS法分离特异性B细胞，并通过反转录和PCR获得单个B细胞抗体的可变区序列，构建重链、轻链重组表达质粒，瞬时转染CHO细胞，表达并利用Protein G纯化获得完整的抗CSFV Erns蛋白单克隆抗体，并鉴定了该抗体识别的抗原表位序列为113TCRYDKNTDVNVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSF146。
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公开(公告)号：CN117757752A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311869243.4
申请日：2023-12-31
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达PRRSV次要结构蛋白的Marc‑145细胞系，该PRRSV次要结构蛋白包括GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明还公开了Marc‑145细胞系的制备方法，包括以下步骤：将猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4‑F112的次要结构蛋白DNA序列克隆到具有嘌呤霉素抗性的慢病毒载体上，应用慢病毒三质粒包装系统在293T细胞包装慢病毒，然后感染Marc‑145细胞，用嘌呤霉素选择性筛选，挑选单克隆细胞纯化，得到稳定表达次要结构蛋白的Marc‑145细胞株，所述次要结构蛋白选自下述任意一个：PRRSV次要结构蛋白GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明的Marc‑145细胞系，可用于PRRSV复制缺陷型疫苗的研发与筛选，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116904512A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310916062.6
申请日：2023-07-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种基于体外连接手段的拯救猪流行性腹泻病毒FJzz1株的反向遗传系统及其应用。通过对其全基因组进行分析，在其全基因组内特有的限制性内切酶酶切位点的基础上，我们将其分为A、B、C、D、E、F和G大小不等的七个片段。随后为提高后续连接效率，我们将这七个小片段整合为AB、CDE和FG三个大片段。利用T7体外转录试剂盒将全长cDNA体外转录为RNA转录本与N基因RNA转录本一起转染至Vero细胞拯救病毒。成功获得了可稳定遗传，且具有遗传标记的rFJzz1弱毒感染性克隆毒株，为后续研究FJzz1株PEDV致病机理和新型疫苗的研制提供了技术平台。
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公开(公告)号：CN112779228B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202110187738.3
申请日：2021-02-18
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N7/08 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒疫苗株及其制备方法，所述疫苗株为将FJzz1在Vero细胞连续传至200代获得。选取低代次FJzz1‑F20和高代次FJzz1‑F200毒株对仔猪进行了致病性评价，结果显示高代次FJzz1‑F200感染组仔猪临床表现明显轻于FJzz1‑F20感染组，且发病猪未有死亡。与FJzz1‑F20感染组相比，FJzz1‑F200感染组仔猪的粪便排毒量和肠组织中的病毒载量显著降低，且肠道组织无明显组织病理学改变。同时，检测发现FJzz1‑F200感染组在肠组织中可以诱导高水平的I型和III型干扰素产生。上述研究结果表明，本发明的FJzz1‑F200其致病性弱，具有作为PEDV候选弱毒疫苗毒株的潜力。
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