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公开(公告)号：CN115851614A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202111115249.3
申请日：2021-09-23
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒复制缺陷型疫苗株，所述疫苗株包含猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4‑F112的基因组核酸突变体，该突变体是将HuN4‑F112基因组的E蛋白基因突变使该E蛋白不表达。本发明的复制缺陷型疫苗株，首先在PRRSV弱毒疫苗株HuN4‑F112感染性分子克隆的基础上构建E蛋白缺失复制子，同时构建一种稳定表达PRRSV E蛋白的细胞系；然后将E蛋白缺失复制子载体线性化并且体外转录成病毒RNA，转染到稳定表达PRRSV E蛋白的细胞系中，成功进行病毒拯救，获得了PRRSV复制缺陷型疫苗株，该疫苗株能有效解决PRRSV灭活疫苗不能诱导细胞免疫、免疫效果差等缺点，同时解决PRRSV弱毒疫苗的安全性问题，为PRRSV的防控与净化提供一种安全有效的新型PRRSV活疫苗，具有广泛的应用前景。
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公开(公告)号：CN118755766A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202410800950.6
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种ISG15、DDIT4和IFNAR1三基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系的构建方法和应用。本发明中，利用CRISPR/Cas9技术对永生化的猪肺泡巨噬细胞系(mPAM)依次敲除ISG15、DDIT4和I型干扰素受体基因IFNAR1，命名为mPAM‑ISG15‑/‑/IFNAR1‑/‑/DDIT4‑/‑细胞系。同时敲除ISG15、DDIT4和IFNAR1的mPAM可促进病毒的复制，显著提高病毒的滴度，而且三基因敲除后对细胞的活性无显著影响。为非洲猪瘟病毒工业化生产奠定了基础，对非洲猪瘟这一重大动物疫病的防控和生猪养殖具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN117757752A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311869243.4
申请日：2023-12-31
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达PRRSV次要结构蛋白的Marc‑145细胞系，该PRRSV次要结构蛋白包括GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明还公开了Marc‑145细胞系的制备方法，包括以下步骤：将猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4‑F112的次要结构蛋白DNA序列克隆到具有嘌呤霉素抗性的慢病毒载体上，应用慢病毒三质粒包装系统在293T细胞包装慢病毒，然后感染Marc‑145细胞，用嘌呤霉素选择性筛选，挑选单克隆细胞纯化，得到稳定表达次要结构蛋白的Marc‑145细胞株，所述次要结构蛋白选自下述任意一个：PRRSV次要结构蛋白GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明的Marc‑145细胞系，可用于PRRSV复制缺陷型疫苗的研发与筛选，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116904512A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310916062.6
申请日：2023-07-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种基于体外连接手段的拯救猪流行性腹泻病毒FJzz1株的反向遗传系统及其应用。通过对其全基因组进行分析，在其全基因组内特有的限制性内切酶酶切位点的基础上，我们将其分为A、B、C、D、E、F和G大小不等的七个片段。随后为提高后续连接效率，我们将这七个小片段整合为AB、CDE和FG三个大片段。利用T7体外转录试剂盒将全长cDNA体外转录为RNA转录本与N基因RNA转录本一起转染至Vero细胞拯救病毒。成功获得了可稳定遗传，且具有遗传标记的rFJzz1弱毒感染性克隆毒株，为后续研究FJzz1株PEDV致病机理和新型疫苗的研制提供了技术平台。
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公开(公告)号：CN118878668A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202411175381.7
申请日：2024-08-26
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明公开了一种特异性识别PEDV nsp12蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明以纯化的PEDV Nsp12蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到稳定分泌抗PEDV nsp12蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该单克隆抗体能特异性的识别PEDV及其nsp12蛋白，而与其他常见的猪源病毒不发生反应。本发明制备的单克隆抗体PEDV SHNA可用于检测猪流行性腹泻病毒，可应用于PEDV nsp12蛋白的检测，可应用于PEDV感染机制研究，为后续研究PEDV Nsp12与宿主细胞互作的作用机制提供了分子基础。
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公开(公告)号：CN118725054A
公开(公告)日：2024-10-01
申请号：CN202411079537.1
申请日：2024-08-07
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/165 , C12N15/50 , C12N15/85 , C12N1/21 , A61K39/215 , A61K47/44 , A61K47/28 , A61P31/14 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒的自复制mRNA疫苗的构建方法和应用，属于医药技术领域。所述自复制mRNA疫苗包括如SEQ ID NO：1所述序列。还公开了脂质纳米颗粒包裹的自复制mRNA疫苗，其包括所述的自复制mRNA疫苗，以及用于包裹所述自复制mRNA疫苗的脂质，本发明制备的mRNA疫苗，能够快速应对当前流行的猪流行性腹泻病毒，减少了新疫苗开发的研发生产周期。疫苗有效性试验表明本发明制备的自复制mRNA疫苗具有良好的免疫原性，体内可产生高水平的猪流行性腹泻病毒的中和抗体。
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公开(公告)号：CN113444837A
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN202110607667.8
申请日：2021-06-01
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种非洲猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测试剂盒及其应用，该方法仅特异性扩增ASFV，不与CSFV、PRRSV、PEDV、PRV等发生交叉反应，特异性较高。该方法的最低检测数为10个拷贝，本研究建立基于ASFV E248R基因的TaqMan实时荧光定量检测方法是一种特异、灵敏、高效的可应用于临床的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。
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公开(公告)号：CN110904152A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911159887.8
申请日：2019-11-23
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）p54蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗及构建方法。对rPRRSV-p54感染孔进行间接免疫荧光，发现视野下出现了抗PRRSV N蛋白的特异性荧光及抗ASFV p54蛋白的特异性荧光。说明该表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组PRRSV可以保证外源蛋白ASFV的p54蛋白得到良好的高效的稳定的表达。而有研究表明p54是重要的抗原蛋白，能够用于ASF的疫苗研制。
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公开(公告)号：CN119158007A
公开(公告)日：2024-12-20
申请号：CN202410799367.8
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供了表达白细胞介素‑15和白细胞介素‑18的重组PRRSV基因工程活载体疫苗及其应用。本发明提供的pPRRSV‑IL15‑Y和pPRRSV‑IL18‑Y这2个重组质粒转染MARC‑145细胞后，成功拯救出活病毒，与亲本病毒vHuN4‑F112具有相似的病毒学特性。将两株重组病毒进行猪体免疫实验，发现两种重组病毒对猪体均具有良好的安全性，免疫后可以有效诱导机体产生免疫应答，产生高水平的针对PRRSV N蛋白的抗体，而且可以诱导更高的细胞免疫水平，是一种良好的基因工程疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN116904512B
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202310916062.6
申请日：2023-07-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种基于体外连接手段的拯救猪流行性腹泻病毒FJzz1株的反向遗传系统及其应用。通过对其全基因组进行分析，在其全基因组内特有的限制性内切酶酶切位点的基础上，我们将其分为A、B、C、D、E、F和G大小不等的七个片段。随后为提高后续连接效率，我们将这七个小片段整合为AB、CDE和FG三个大片段。利用T7体外转录试剂盒将全长cDNA体外转录为RNA转录本与N基因RNA转录本一起转染至Vero细胞拯救病毒。成功获得了可稳定遗传，且具有遗传标记的rFJzz1弱毒感染性克隆毒株，为后续研究FJzz1株PEDV致病机理和新型疫苗的研制提供了技术平台。
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