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公开(公告)号：CN120026058A
公开(公告)日：2025-05-23
申请号：CN202510187876.X
申请日：2025-02-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N15/85 , C12N15/35 , C12N7/01 , C12N7/04 , A61K39/12 , A61K39/23 , A61P31/14 , A61P31/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种嵌合重组质粒pPRRSV‑VP2‑Y、其嵌合病毒及其应用。本发明在高致病性PRRSV细胞致弱毒株HuN4‑F112的ORF1b和ORF2a之间插入源于猪细小病毒的VP2‑Y基因，构建得到嵌合重组质粒pPRRSV‑VP2‑Y；使用本发明所构建的嵌合重组质粒转染MARC‑145细胞后所拯救出来的病毒具有和亲本病毒vHuN4‑F112相似的病毒生物学特性，同时，基于上述重组质粒，构建的嵌合重组疫苗株对猪体具有较好的安全性，免疫后可有效诱导机体产生免疫应答，能够产生高水平的与亲本疫苗相似的PRRSVN蛋白抗体，而且可以诱导产生PPVVP2抗体。
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公开(公告)号：CN118791578B
公开(公告)日：2024-12-27
申请号：CN202411023175.4
申请日：2024-07-29
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/08 , C07K19/00 , C07K16/10 , C12N15/40 , C12N15/70 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp12蛋白的抗原表位、单克隆抗体及应用，本研究利用表达和纯化后的nsp12蛋白为抗原免疫小鼠，通过间接ELISA和IFA等免疫学检测方法成功地筛选获得了5株能够稳定分泌nsp12mAb的阳性杂交瘤细胞株。结果表明，单抗3G11和9C2识别抗原表位为93TWGFESDTAY102，2E3识别抗原表位为115DYNDAFRARQ124，10G6和2A4识别抗原表位为142PGPVIEPTL150。而且，新鉴定出的三个抗原表位均位于nsp12蛋白表面，属于免疫显性抗原表位，在PRRSV‑2不同毒株之间的nsp12蛋白中三个抗原表位高度保守，可以作为PRRSV‑2检测的靶标，有助于PRRSV检测方法的开发。
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公开(公告)号：CN110904153A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911159891.4
申请日：2019-11-23
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）p12蛋白或者p17蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗及构建方法。对rPRRSV-p12和rPRRSV-p17感染孔进行间接免疫荧光，发现视野下出现了抗PRRSV N蛋白的特异性荧光及抗ASFV p12蛋白或p17蛋白的特异性荧光。说明该表达非洲猪瘟病毒p12蛋白或p17蛋白的重组PRRSV可以保证外源蛋白ASFV的p12或p17蛋白得到良好的高效的稳定的表达。而有研究表明p12和p17都是重要的抗原蛋白，能够用于ASF的疫苗研制。
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公开(公告)号：CN110628817A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910889362.3
申请日：2019-09-19
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）p30蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗及构建方法。对rPRRSV-p30感染孔进行间接免疫荧光，发现视野下出现了抗PRRSV N蛋白的特异性荧光及抗ASFV p30蛋白的特异性荧光。收取rPRRSV-p30的感染孔的蛋白样品，对其进行western blot，结果发现出现了预期大小的p30条带。说明该表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV可以保证外源蛋白ASFV的p30蛋白得到良好的高效的稳定的表达。而有研究表明p30是重要的抗原蛋白，能够用于ASF的疫苗研制。
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公开(公告)号：CN117904072A
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202410024495.5
申请日：2024-01-08
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N9/14 , C12N15/55 , C12N15/70 , C07K16/40 , C07K16/06 , G01N33/577 , G01N33/573 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一株针对PRRSV解旋酶的抗原表位、单克隆抗体制备方法及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp10，利用大肠杆菌表达重组Nsp10，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗PRRSV Nsp10的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为425TDKRVVDSLR434。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117904072B
公开(公告)日：2025-01-28
申请号：CN202410024495.5
申请日：2024-01-08
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N9/14 , C12N15/55 , C12N15/70 , C07K16/40 , C07K16/06 , G01N33/577 , G01N33/573 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一株针对PRRSV解旋酶的抗原表位、单克隆抗体制备方法及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp10，利用大肠杆菌表达重组Nsp10，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗PRRSV Nsp10的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为425TDKRVVDSLR434。
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公开(公告)号：CN117886906B
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202410087827.4
申请日：2024-01-22
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/18 , C07K16/10 , C12N15/13 , A61K39/187 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其应用。通过构建真核表达载体pCDNA3.4‑Erns‑strep，瞬时转染CHO细胞表达重组Erns蛋白，利用strep标签纯化重组蛋白，四次免疫Balb/C小鼠，分离小鼠脾细胞，利用FACS法分离特异性B细胞，并通过反转录和PCR获得单个B细胞抗体的可变区序列，构建重链、轻链重组表达质粒，瞬时转染CHO细胞，表达并利用Protein G纯化获得完整的抗CSFV Erns蛋白单克隆抗体，并鉴定了该抗体识别的抗原表位序列为113TCRYDKNTDVNVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSF146。
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公开(公告)号：CN118755766A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202410800950.6
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种ISG15、DDIT4和IFNAR1三基因敲除的猪肺泡巨噬细胞系的构建方法和应用。本发明中，利用CRISPR/Cas9技术对永生化的猪肺泡巨噬细胞系(mPAM)依次敲除ISG15、DDIT4和I型干扰素受体基因IFNAR1，命名为mPAM‑ISG15‑/‑/IFNAR1‑/‑/DDIT4‑/‑细胞系。同时敲除ISG15、DDIT4和IFNAR1的mPAM可促进病毒的复制，显著提高病毒的滴度，而且三基因敲除后对细胞的活性无显著影响。为非洲猪瘟病毒工业化生产奠定了基础，对非洲猪瘟这一重大动物疫病的防控和生猪养殖具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN117903262B
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202410083824.3
申请日：2024-01-19
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/08 , C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp7单克隆抗体的制备、表位鉴定及应用。通过构建原核表达载体pCold‑I‑Nsp7，利用大肠杆菌表达重组Nsp7，纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗Nsp7的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的抗原表位为184KFWDKNSGD192。
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公开(公告)号：CN117886906A
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202410087827.4
申请日：2024-01-22
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/18 , C07K16/10 , C12N15/13 , A61K39/187 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、单克隆抗体及其应用。通过构建真核表达载体pCDNA3.4‑Erns‑strep，瞬时转染CHO细胞表达重组Erns蛋白，利用strep标签纯化重组蛋白，四次免疫Balb/C小鼠，分离小鼠脾细胞，利用FACS法分离特异性B细胞，并通过反转录和PCR获得单个B细胞抗体的可变区序列，构建重链、轻链重组表达质粒，瞬时转染CHO细胞，表达并利用Protein G纯化获得完整的抗CSFV Erns蛋白单克隆抗体，并鉴定了该抗体识别的抗原表位序列为113TCRYDKNTDVNVVTQARNRPTTLTGCKKGKNFSF146。
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