公开(公告)号：CN116445645A

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202310252064.X

申请日：2023-03-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  张爽爽 ,  何俊 ,  饶欣雨 ,  赵勇 ,  陈发棣 ,  房伟民

IPC: C12Q1/6895 ,  C12Q1/6841 ,  C12N15/11 ,  G16B25/20 ,  G16B20/30 ,  G16B50/00

Abstract: 本发明公开了一种荧光原位杂交探针组，该寡核苷酸探针组包括重复序列寡核苷酸探针SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ IDNO.6。同时，公开了该荧光原位杂交探针的基于转录组快速获得方法，包含该荧光原位杂交探针的寡核苷酸探针杂交液，进行染色体高分辨率荧光原位杂交的方法。本发明方法简单易行，可操作性强，高效性和实用性突出。

公开(公告)号：CN115813999A

公开(公告)日：2023-03-21

申请号：CN202211459774.1

申请日：2022-11-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  董殿举 ,  陈发棣 ,  蒋修齐 ,  管志勇 ,  房伟民 ,  廖园 ,  陈素梅

IPC: A61K36/815 ,  A23L19/00 ,  A23L33/10 ,  A23L33/125 ,  C08B37/00 ,  A61K31/715

Abstract: 本发明公开了一种基于多糖提取制作无水菊花枸杞原浆的方法，该方法包括：（1）将菊花采用高压剪切、超临界流体萃取及等温降压工艺流程提取有效成分多糖，该过程不添加任何水；（2）将提取的多糖进行烘干，粉碎过筛，用枸杞制得的原浆稀释后加入枸杞原浆母液中混合既得。该方法采用高压剪切、超临界流体萃取及等温降压等一定的工艺流程提取有效成分，提取的多糖没有异味、品质优良，解决了菊花品种产量低或药用成分不高等现象，多糖得率可高达22.5%，并将菊花中的多糖提取物与枸杞原浆混合打破了菊花固态和液态枸杞原浆混合的技术问题。

公开(公告)号：CN115537424A

公开(公告)日：2022-12-30

申请号：CN202110745127.6

申请日：2021-06-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 滕年军 ,  徐素娟 ,  侯慧中 ,  吴泽 ,  赵静雅 ,  张凤姣 ,  滕人达 ,  丁利平 ,  陈发棣

IPC: C12N15/82 ,  C12Q1/6895 ,  C12Q1/6851 ,  A01H5/10 ,  A01H6/00 ,  A01H1/02

Abstract: 本发明公开了一种高效降低菊花杂交胚胎败育率的方法，包括如下步骤：(1)构建CmERF12基因的干扰表达载体；(2)将所构建的干扰表达载体转入菊花中筛选CmERF12基因表达量低的CmERF12转基因菊花干扰株系；(3)以所筛选的CmERF12转基因菊花干扰株系为亲本与其他菊花亲本进行人工杂交降低菊花杂交胚胎败育率。本发明提供了一种采用基因调控技术降低菊花远缘杂交胚胎败育率的方法，该方法能够显著提高菊花远缘杂交的结实率，♀C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率为1.07％，而采用该方法后♀CmERF12‑RNAi‑C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率显著上升，最高比例约5.07％。该方法能够显著克服远缘杂交生殖发育障碍，从而提高了育种效率,加速育种进程。

公开(公告)号：CN111394800B

公开(公告)日：2022-04-08

申请号：CN202010175583.7

申请日：2020-03-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 宋爱萍 ,  余琪 ,  苏江硕 ,  胡月姮 ,  张璐瑶 ,  刘晔 ,  周李杰 ,  陈发棣

IPC: C40B50/06 ,  C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了一种新的评估由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的方法，该方法能够体现文库中插入基因数量、基因丰度等关键性指标，解决了传统的由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量评估方法的片面性，适合一般的实验室进行准确的文库评估。该方法通过文库15轮循环数的PCR扩增、产物回收之后的浓度测定和电泳情况初步判断，之后将回收产物进行高通量测序、de novo组装后详细分析，获得文库的插入基因数量、基因丰度等关键性指标，完成由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的准确评估。同时，还能获得无参考基因组物种基因的序列信息，为下一步互作蛋白编码基因的克隆提供基础。

公开(公告)号：CN111635902B

公开(公告)日：2022-03-25

申请号：CN202010482826.1

申请日：2020-05-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈发棣 ,  辛静静 ,  刘晔 ,  蒋甲福 ,  管志勇 ,  陈素梅 ,  房伟民

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/14 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于植物基因工程育种领域，涉及一种通过人工干扰提高菊花黑斑病抗性的方法，包括以下步骤：构建pMDC32‑amiCmKIC植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT‑PCR检测证实amiRNA在转录水平上影响靶基因CmKIC的表达。对转基因植株进行抗病性检测，发现与野生型植株相比，转基因植株抗病性有很大提高。本发明通过人工干扰CmKIC基因提高菊花的黑斑病抗性，为利用基因工程技术选育菊花抗病品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。

公开(公告)号：CN109792953B

公开(公告)日：2022-03-22

申请号：CN201910085888.6

申请日：2019-01-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王海滨 ,  曲晓慧 ,  陈发棣 ,  陈希 ,  蒋甲福 ,  张飞 ,  宋爱萍

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种菊花组培方法。本发明发包括配制多种抑菌剂组合的抑菌培养基，并向其中接种自然界广泛存在且易提取的灰绿青霉，使灰绿青霉在抑菌剂的作用下处于潜伏状态，并不引起真菌污染，在这种培养基中培养的菊花组培苗生长发育状况和炼苗后的表现均正常，对菊花种苗的产量和质量均无影响；将抑菌培养基中的菊花组培苗接种到普通培养基中，没有抑菌剂的抑制作用，组培苗大范围爆发真菌污染且污染率达100％。通过此方法在保证菊花组培苗生产效率与质量的同时，能够有效保护菊花的知识产权品种，只有拥有品种授予权的单位可以获得健康的组培苗，防止优良品种非法外流。

公开(公告)号：CN113930445A

公开(公告)日：2022-01-14

申请号：CN202111120827.2

申请日：2021-09-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 宋爱萍 ,  张佳丽 ,  余琪 ,  孙道金 ,  管志勇 ,  房伟民 ,  陈素梅 ,  陈发棣

IPC: C12N15/84 ,  A01H5/02 ,  A01H6/14

Abstract: 本发明提供了一种在头状花序中实现基因瞬时转染的方法，涉及基因工程技术领域，本发明提供的在头状花序中实现基因瞬时表达的方法，采用真空渗透作用瞬时转化带蕾插穗生根、开花的植物头状花序，瞬时转化5‑7天即可实现可检测量的目的基因的转染，此方法具有操作简单、转化周期短、转化效率高等优点，并且可以实现高效率的头状花序中外源基因瞬时表达，克服了头状花序难以转化成功的难题，为植物开花基因功能研究奠定了方法学基础，为分子育种和品种改良提供方法，具有较高的实用性和科研应用价值。

公开(公告)号：CN108998454B

公开(公告)日：2021-11-12

申请号：CN201810916726.8

申请日：2018-08-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈素梅 ,  夏小龙 ,  李菲 ,  张皖皖 ,  邵亚峰 ,  蒋甲福 ,  陈发棣 ,  房伟民 ,  管志勇 ,  王银杰 ,  张倩丽

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/14

Abstract: 本发明公开了一种与菊花脑抗蚜性相关的miRNA160a及其应用，所述的miRNA160a具有序列表中SEQ ID NO.1所示的序列特征，可利用该miRNA进行抗蚜转基因植物的培育，进而提高植物的抗蚜性；通过TRV‑VbMS技术，在菊花脑中过表达含有SEQ ID NO.2所示的内源目的miR160a结合位点的STTM序列片段的TRV2e病毒沉默表达载体质粒，借助抽真空法瞬时转化菊花脑，诱导菊花脑内源目的miR160a发生沉默，从而鉴定该内源目的miR160a的功能。本发明方法提供了一种提高植物抗蚜性的miRNA160a，并提供了TRV‑VbMS沉默菊花脑内源miRNA从而鉴定miRNA功能的体系，其具有快速，高通量，易于操作等优势，为开展菊花脑miRNA功能研究提供了新途径。

公开(公告)号：CN113186207A

公开(公告)日：2021-07-30

申请号：CN202110229366.6

申请日：2021-03-02

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 蒋甲福 ,  罗宇婷 ,  韩笑盈 ,  林娇阳 ,  周李杰 ,  吴慧莹 ,  陈素梅 ,  房伟民 ,  陈发棣

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12N15/84 ,  C12N5/10 ,  A01H5/02 ,  A01H6/14 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于基因工程技术和转基因育种领域，公开一种通过转蓝目菊OhF3'5'H基因培育蓝色菊花的方法，通过将OhF3'5'H基因植物表达载体导入切花菊进行表达以使菊花花瓣产生蓝色花色苷。包括如下步骤：(1)构建花瓣中特异表OhF3'5'H基因植物表达载体；(2)农杆菌EHA105介导的叶盘法转化菊花；(3)转OhF3'5'H基因植株的表型观察和分析。通过对抗性生根植株进行PCR、半定量RT‑PCR检测证实OhF3'5'H基因已整合到转基因植株基因组中并转录表达，对转基因植株的花色进行观察和分析证实菊花产生了蓝色花色苷，为利用基因工程技术选育蓝色品种提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。

公开(公告)号：CN111961677A

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN202010912874.X

申请日：2020-09-02

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 陈发棣 ,  丁莲 ,  李松 ,  夏伟康 ,  张雪 ,  刘家佑

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/02 ,  A01H5/04 ,  A01H5/12 ,  A01H6/14 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmCUC2基因调控菊花花型、叶形和株型的方法，根据切花大菊‘神马’中CmCUC2基因序列，人工合成突变的CmCUC2基因序列(mCmCUC2)，采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对抗性植株进行DNA和RNA水平检测，证实mCmCUC2基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，转基因株系花瓣外翻、花瓣尖端条裂、花型整体呈翻卷型；叶裂加深；植株矮小、节间距缩短。本发明可广泛应用于切花菊和案头菊的培育等方面，为利用基因工程技术改良花卉重要农艺性状，易于轻简化栽培提供新颖而实用的方法，具有较高的应用价值。