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公开(公告)号：CN111394800A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010175583.7
申请日：2020-03-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C40B50/06 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种新的评估由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的方法，该方法能够体现文库中插入基因数量、基因丰度等关键性指标，解决了传统的由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量评估方法的片面性，适合一般的实验室进行准确的文库评估。该方法通过文库15轮循环数的PCR扩增、产物回收之后的浓度测定和电泳情况初步判断，之后将回收产物进行高通量测序、de novo组装后详细分析，获得文库的插入基因数量、基因丰度等关键性指标，完成由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的准确评估。同时，还能获得无参考基因组物种基因的序列信息，为下一步互作蛋白编码基因的克隆提供基础。
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公开(公告)号：CN112301117B
公开(公告)日：2022-06-03
申请号：CN202011140853.7
申请日：2020-10-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/10 , G16B5/00 , G16B25/20
Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111394800B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010175583.7
申请日：2020-03-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C40B50/06 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种新的评估由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的方法，该方法能够体现文库中插入基因数量、基因丰度等关键性指标，解决了传统的由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量评估方法的片面性，适合一般的实验室进行准确的文库评估。该方法通过文库15轮循环数的PCR扩增、产物回收之后的浓度测定和电泳情况初步判断，之后将回收产物进行高通量测序、de novo组装后详细分析，获得文库的插入基因数量、基因丰度等关键性指标，完成由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的准确评估。同时，还能获得无参考基因组物种基因的序列信息，为下一步互作蛋白编码基因的克隆提供基础。
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公开(公告)号：CN111197049A
公开(公告)日：2020-05-26
申请号：CN202010030360.1
申请日：2020-01-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种通过转基因技术创制植株矮小、粗壮的菊花的方法，属于植物基因工程和转基因育种领域。该方法包括从菊花中克隆CmYAB3.1基因；构建CmYAB3.1基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对转化植株进行分子检测证实CmYAB3.1基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的高度明显变矮，茎杆变粗。本发明通过转基因技术调控了菊花株型，获得适合作案头菊的矮壮的植株，为利用基因工程技术调控花卉重要农艺性状，易于轻简化栽培提供新颖而实用的方法，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN111197049B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202010030360.1
申请日：2020-01-13
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提供了一种通过转基因技术创制植株矮小、粗壮的菊花的方法，属于植物基因工程和转基因育种领域。该方法包括从菊花中克隆CmYAB3.1基因；构建CmYAB3.1基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行培养初步获得抗性植株。对转化植株进行分子检测证实CmYAB3.1基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的高度明显变矮，茎杆变粗。本发明通过转基因技术调控了菊花株型，获得适合作案头菊的矮壮的植株，为利用基因工程技术调控花卉重要农艺性状，易于轻简化栽培提供新颖而实用的方法，具有较高的应用价值。
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公开(公告)号：CN112301117A
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN202011140853.7
申请日：2020-10-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/10 , G16B5/00 , G16B25/20
Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。
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公开(公告)号：CN109943573A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910264318.3
申请日：2019-04-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmWRKY7基因改变切花菊萜烯类挥发物含量的方法，包括以下步骤：从茶用菊‘滁菊’中克隆CmWRKY7基因；构建CmWRKY7基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行筛选培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY7内源基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的萜烯类挥发物含量改变。本发明通过转化内源CmWRKY7转录因子并正常转录表达，从而调控了萜烯生物合成，为利用基因工程技术提高切花菊芳香品质提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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