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公开(公告)号：CN112301117A
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN202011140853.7
申请日：2020-10-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6869 , C12N15/10 , G16B5/00 , G16B25/20
Abstract: 本发明公开了一种基于高通量测序构建目标蛋白互作网络的方法，该方法将BD‑诱饵与猎物文库共转化Y2H酵母菌株，在YPDplus培养基中30℃培养4h后，弃上清，加入1mL无菌水基悬浮，取100μL悬浮菌液再加入10ml SD/‑Leu/‑Trp/‑His/‑Ade液体培养基中震荡培养24h、72h和80h后分别取样，以这些菌液为模版进行PCR扩增，进行琼脂糖凝胶电泳检测菌液筛选程度，将产物回收之后进行高通量测序、de novo组装后进行基因丰度与差异分析，取差异基因即为该文库中与目的基因互作的蛋白编码基因，从而初步构建目标蛋白的互作网络。该方法同时适用于无参考基因物种目标蛋白互作网络的构建。该方法简化了酵母双杂交筛库的步骤，不受单次筛选克隆数限制，找到单个文库中目标蛋白的所有互作蛋白。
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公开(公告)号：CN109943573A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910264318.3
申请日：2019-04-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程和转基因育种领域，涉及一种通过转CmWRKY7基因改变切花菊萜烯类挥发物含量的方法，包括以下步骤：从茶用菊‘滁菊’中克隆CmWRKY7基因；构建CmWRKY7基因植物表达载体；采用农杆菌介导法将其转入菊花中，进行筛选培养初步获得抗性植株。对转化植株进行PCR、定量RT-PCR检测证实CmWRKY7内源基因已经整合到转基因植株的基因组DNA中并发生转录。对转基因植株进行表型观察与统计分析，发现与未转基因植株相比，转基因植株的萜烯类挥发物含量改变。本发明通过转化内源CmWRKY7转录因子并正常转录表达，从而调控了萜烯生物合成，为利用基因工程技术提高切花菊芳香品质提供新颖而实用的方法，将有效推动菊花生物技术育种进程。
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公开(公告)号：CN103146712B
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201310096562.6
申请日：2013-03-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及菊花bHLH转录因子CmbHLH1基因及其植物表达载体和应用。本发明菊花bHLH转录因子CmbHLH1基因序列如SEQ ID NO.1所示，所构建的表达载体pCAMBIA1301‐（+/‐）‐CmbHLH1是将CmbHLH1基因插入到克隆载体pMD19‐T simple vector(Takara)，后经过BamH I(Takara)和Sac I(Takara)双酶切后连接到表达载体pCAMBIA1301的BamH I和Sac I位点得到的。将该植物表达载体用于植物遗传转化，正反义CmbHLH1基因在CaMV35S启动子的启动下过量表达，从而达到影响下游目的基因的表达效果，提高植物铁离子的吸收能力并进一步验证该基因的功能。菊属中该基因是首次发现与铁离子吸收相关的bHLH转录因子。
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公开(公告)号：CN102161697B
公开(公告)日：2013-03-13
申请号：CN201110039172.6
申请日：2011-02-17
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07K14/415 , C12N15/29 , C12N15/82 , C12N15/66 , A01H5/00
Abstract: 菊花抗逆转录因子CmMYB2及其植物表达载体和构建方法及应用,属于分子生物学领域。本发明所构建的表达载体pCAMBIA1301-CmMYB2是由CmMYB2基因插入到克隆载体pMD19-Tsimplevector(Takara)，经BamH (Takara)和Sac (Takara)双酶切后连接到表达载体pCAMBIA1301的BamH和Sac位点得到的。将该植物表达载体用于植物遗传转化，CmMYB2基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达，大量合成MYB2蛋白，调控下游目的基因的表达，提高植物抗逆性。
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公开(公告)号：CN107815502B
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN201711176758.0
申请日：2017-11-23
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种鉴定菊花耐涝性的dCAPS标记开发方法及应用，属于生物技术领域，该方法包括以下几个步骤：a、通过GWAS方法挖掘与菊花耐涝性显著关联的SNP位点；b、SNP突变位点特异性酶切位点分析及dCAPS引物设计；c、结合基因型与表型数据预期酶切扩增多态性；d、dCAPS标记在自然耐涝极端群体的验证；e、在F1后代耐涝极端群体中对WT‑dCAPS1标记进行进一步验证。本发明开发了一个与菊花耐涝性状共分离的dCAPS共显性标记，命名为WT‑dCAPS1，在两个群体的平均鉴定准确率为78.9％，初步认为可以应用于菊花耐涝性分子标记辅助育种，大大缩短育种周期，对于培育耐涝性菊花新品种具有重要的理论和实践意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111926005A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN201910392989.8
申请日：2019-05-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/11 , C12Q1/6841
Abstract: 本发明提供了一种基于菊属植物重复序列设计的寡核苷酸探针套，并公开了一种基于寡核苷酸探针套的菊属植物有丝分裂中期染色体荧光原位杂交方法。具体为：将染色体制片先于-80℃下保存12h，揭片后放入无水乙醇中脱水30min以上，晾干后制片置于碱变性液中44℃变性5min，室温下置于70.0％、70.0％、100.0％酒精中，依次梯度脱水各5min，气干；配制FISH杂交液并混匀，滴加于染色体制片上，37℃培养箱中进行杂交培养，最后进行信号检测；本发明开发的寡核苷酸探针套和原位杂交方法，可有效的用于菊属植物染色体分析核型图谱的构建(图1)，通过组配好的寡核苷酸探针套通过一次FISH分析进行检测，避免了对一张制片重复多次杂交，大大简化了FISH分析的程序，提高了实验效率。
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公开(公告)号：CN111394800A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010175583.7
申请日：2020-03-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C40B50/06 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种新的评估由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的方法，该方法能够体现文库中插入基因数量、基因丰度等关键性指标，解决了传统的由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量评估方法的片面性，适合一般的实验室进行准确的文库评估。该方法通过文库15轮循环数的PCR扩增、产物回收之后的浓度测定和电泳情况初步判断，之后将回收产物进行高通量测序、de novo组装后详细分析，获得文库的插入基因数量、基因丰度等关键性指标，完成由无参考基因组物种构建的酵母双杂交文库质量的准确评估。同时，还能获得无参考基因组物种基因的序列信息，为下一步互作蛋白编码基因的克隆提供基础。
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公开(公告)号：CN109792953A
公开(公告)日：2019-05-24
申请号：CN201910085888.6
申请日：2019-01-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种保护菊花知识产权品种的组培方法。本发明发包括配制多种抑菌剂组合的抑菌培养基，并向其中接种自然界广泛存在且易提取的灰绿青霉，使灰绿青霉在抑菌剂的作用下处于潜伏状态，并不引起真菌污染，在这种培养基中培养的菊花组培苗生长发育状况和炼苗后的表现均正常，对菊花种苗的产量和质量均无影响；将抑菌培养基中的菊花组培苗接种到普通培养基中，没有抑菌剂的抑制作用，组培苗大范围爆发真菌污染且污染率达100％。通过此方法在保证菊花组培苗生产效率与质量的同时，能够有效保护菊花的知识产权品种，只有拥有品种授予权的单位可以获得健康的组培苗，防止优良品种非法外流。
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公开(公告)号：CN103233075B
公开(公告)日：2016-02-10
申请号：CN201310170677.5
申请日：2013-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种基于转录组测序开发菊属植物SSR引物的方法。利用EST‐SSR的种间转移性，在转录组测序的基础上，结合Perl编程语言方法，对大量序列信息进行批量处理，进行SSR序列查找和SSR标记引物设计，克服了SSR开发效率低、耗时久、成本高等障碍。选择菊属不同种的材料对设计的SSR引物进行验证，若有条带检测出，即为成功的SSR引物。应用本方法成功地设计了1788对SSR引物，为菊属SSR引物开发进而实现分子标记辅助选择育种和比较基因组学研究提供了新的方法和思路。
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公开(公告)号：CN104673938A
公开(公告)日：2015-06-03
申请号：CN201510100532.7
申请日：2015-03-06
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/686 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明属于分子生物学病毒检测领域，提供一种高灵敏度检测菊花B病毒的引物、利用该特异引物检测菊花B病毒的方法及引物的应用。其中，本方法步骤如下：1)设计针对菊花B病毒的两轮特异性引物；2)以CVB1-R为引物，对待检测菊花DNA进行反转录得到cDNA，并以步骤1)所述两轮特异性引物进行巢式PCR扩增；3)将步骤2)进行的第二轮PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，当获得381bp特异性片段时，表示待检测菊花感染菊花B病毒。本发明由于加入了特异的反转录引物进行巢式PCR，极大地提高了菊花B病毒检测灵敏度，经过验证灵敏度达到10-9ug/ul。本发明提供的方法，菊花CVB检测特异性强，工序简单，成本低廉。
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