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公开(公告)号：CN105510292A
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201610031066.6
申请日：2016-01-18
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/64
CPC classification number: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种体外检测菊花胚胎败育过程中Caspase活性的方法及其应用，该方法包括：1)获得菊花远缘杂交后不同发育时期的正常与败育胚珠；2)采用TCA/丙酮沉淀法分别提取步骤1)中所取得的胚珠样品的蛋白质；3)将步骤2)中的蛋白质预处理后分别用Bradford法进行蛋白质定量，并分别调整蛋白浓度；4)用Caspase活性荧光检测方法对正常与败育胚珠的蛋白进行Caspase活性检测。本发明针对菊花远缘杂交后胚胎败育的细胞衰老和凋亡现象，提供了一种快速、准确鉴定菊花胚胎败育过程中诱导细胞死亡的关键Caspase酶，为研究菊花胚胎败育的分子机理，挖掘调控胚胎败育的关键基因和蛋白提供了研究基础。
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公开(公告)号：CN103472182A
公开(公告)日：2013-12-25
申请号：CN201310385454.0
申请日：2013-08-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明公开了一种鉴定菊花远缘杂交胚胎败育相关蛋白的方法，属于菊花育种与蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培小菊作母本，野菊菊花脑作父本开展远缘杂交工作。授粉后不同时间剪下已授粉的花序，分别取形态发育完整、饱满的子房和形态发育异常、不饱满的子房，取样后立即在液氮中速冻后保存于-80℃冰箱中。样品用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质，保存于-80℃。最后运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析，获得与菊花远缘杂交育种中胚胎败育的相关蛋白。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速、准确鉴定菊花胚胎发育过程中不同发育阶段的不同形态的胚胎差异蛋白，为解决菊花远缘杂交胚胎败育提供研究基础。
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公开(公告)号：CN103472182B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310385454.0
申请日：2013-08-29
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明公开了一种鉴定菊花远缘杂交胚胎败育相关蛋白的方法，属于菊花育种与蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培小菊作母本，野菊菊花脑作父本开展远缘杂交工作。授粉后不同时间剪下已授粉的花序，分别取形态发育完整、饱满的子房和形态发育异常、不饱满的子房，取样后立即在液氮中速冻后保存于-80℃冰箱中。样品用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质，保存于-80℃。最后运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析，获得与菊花远缘杂交育种中胚胎败育的相关蛋白。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速、准确鉴定菊花胚胎发育过程中不同发育阶段的不同形态的胚胎差异蛋白，为解决菊花远缘杂交胚胎败育提供研究基础。
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公开(公告)号：CN106442523B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201610597505.X
申请日：2016-07-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/84
Abstract: 本发明公开了一种精确测定切花菊花药开裂程度的方法及其应用，属于菊花遗传育种及生殖生物学领域。该方法包括：(1)获取待测样品的管状花，并对管状花进行解剖，获得花药鲜样，置于玻璃载玻片上；(2)将步骤(1)中的载玻片迅速置于显微镜下开始拍照和录像，然后滴加渗透液至花药鲜样上；(3)对步骤2)中花粉粒从开裂的花药中散出过程进行全程显微录像；(4)根据录像及照片，统计达到稳态后花药外花粉粒数，然后通过公式计算出花药开裂程度。本发明针对品种间散粉量、散粉速度差异极大的切花菊，提供了一种精确测定菊花花药开裂程度的方法，为研究菊花花药开裂程度遗传规律、发掘控制花药开裂程度的有关基因奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106442523A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610597505.X
申请日：2016-07-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N21/84
Abstract: 本发明公开了一种精确测定切花菊花药开裂程度的方法及其应用，属于菊花遗传育种及生殖生物学领域。该方法包括：(1)获取待测样品的管状花，并对管状花进行解剖，获得花药鲜样，置于玻璃载玻片上；(2)将步骤(1)中的载玻片迅速置于显微镜下开始拍照和录像，然后滴加渗透液至花药鲜样上；(3)对步骤2)中花粉粒从开裂的花药中散出过程进行全程显微录像；(4)根据录像及照片，统计达到稳态后花药外花粉粒数，然后通过公式计算出花药开裂程度。本发明针对品种间散粉量、散粉速度差异极大的切花菊，提供了一种精确测定菊花花药开裂程度的方法，为研究菊花花药开裂程度遗传规律、发掘控制花药开裂程度的有关基因奠定了基础。
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公开(公告)号：CN115537424A
公开(公告)日：2022-12-30
申请号：CN202110745127.6
申请日：2021-06-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/82 , C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , A01H5/10 , A01H6/00 , A01H1/02
Abstract: 本发明公开了一种高效降低菊花杂交胚胎败育率的方法，包括如下步骤：(1)构建CmERF12基因的干扰表达载体；(2)将所构建的干扰表达载体转入菊花中筛选CmERF12基因表达量低的CmERF12转基因菊花干扰株系；(3)以所筛选的CmERF12转基因菊花干扰株系为亲本与其他菊花亲本进行人工杂交降低菊花杂交胚胎败育率。本发明提供了一种采用基因调控技术降低菊花远缘杂交胚胎败育率的方法，该方法能够显著提高菊花远缘杂交的结实率，♀C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率为1.07％，而采用该方法后♀CmERF12‑RNAi‑C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率显著上升，最高比例约5.07％。该方法能够显著克服远缘杂交生殖发育障碍，从而提高了育种效率,加速育种进程。
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公开(公告)号：CN115537424B
公开(公告)日：2024-12-13
申请号：CN202110745127.6
申请日：2021-06-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/82 , C12Q1/6895 , C12Q1/6851 , A01H5/10 , A01H6/00 , A01H1/02
Abstract: 本发明公开了一种高效降低菊花杂交胚胎败育率的方法，包括如下步骤：(1)构建CmERF12基因的干扰表达载体；(2)将所构建的干扰表达载体转入菊花中筛选CmERF12基因表达量低的CmERF12转基因菊花干扰株系；(3)以所筛选的CmERF12转基因菊花干扰株系为亲本与其他菊花亲本进行人工杂交降低菊花杂交胚胎败育率。本发明提供了一种采用基因调控技术降低菊花远缘杂交胚胎败育率的方法，该方法能够显著提高菊花远缘杂交的结实率，♀C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率为1.07％，而采用该方法后♀CmERF12‑RNAi‑C.m.×♂C.n.杂交组合的结实率显著上升，最高比例约5.07％。该方法能够显著克服远缘杂交生殖发育障碍，从而提高了育种效率,加速育种进程。
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公开(公告)号：CN102841126B
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201210315398.9
申请日：2012-08-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定菊花花粉与柱头互作差异蛋白的方法，属于菊花蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培菊花作母本，野菊为父本进行菊花远缘杂交工作。授粉后1h及24h，剪下已授粉的花序；去除取得的花序中舌状花花瓣及萼片得到雌蕊。所得的雌蕊用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质样品；运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速准确鉴定菊花花粉与柱头互作过程中的关键差异蛋白，为解决菊花远缘杂交不亲和性提供研究基础。
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公开(公告)号：CN102841126A
公开(公告)日：2012-12-26
申请号：CN201210315398.9
申请日：2012-08-30
Applicant: 南京农业大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定菊花花粉与柱头互作差异蛋白的方法，属于菊花蛋白质组学领域。该方法包括：以栽培菊花作母本，野菊为父本进行菊花远缘杂交工作。授粉后1h及24h，剪下已授粉的花序；去除取得的花序中舌状花花瓣及萼片得到雌蕊。所得的雌蕊用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质样品；运用iTRAQ与质谱技术快速鉴定差异蛋白，并进行生物信息学分析。本发明针对菊花及其近缘属野生种，提供了一种快速准确鉴定菊花花粉与柱头互作过程中的关键差异蛋白，为解决菊花远缘杂交不亲和性提供研究基础。
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