公开(公告)号：CN103290142B

公开(公告)日：2015-03-11

申请号：CN201310105226.3

申请日：2013-03-29

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  范斌 ,  马志亮 ,  刘旭川 ,  邹丰才 ,  柴俊 ,  刘岳 ,  柳桐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准曲线建立、有效性验证和结果判定。外侧引物（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2）用于构建标准质粒，内侧引物（SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4）用于样品检测，内侧引物扩增片段包含于外侧引物扩增片段之内，两对引物均能特异性扩增猪蓝耳病弱毒疫苗株病毒，扩增产物大小分别为287bp和130bp。本方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪蓝耳病病毒弱毒疫苗病毒含量的测定。

公开(公告)号：CN103290142A

公开(公告)日：2013-09-11

申请号：CN201310105226.3

申请日：2013-03-29

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  范斌 ,  马志亮 ,  刘旭川 ,  邹丰才 ,  柴俊 ,  刘岳 ,  柳桐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准曲线建立、有效性验证和结果判定。外侧引物（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2）用于构建标准质粒，内侧引物（SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4）用于样品检测，内侧引物扩增片段包含于外侧引物扩增片段之内，两对引物均能特异性扩增猪蓝耳病弱毒疫苗株病毒，扩增产物大小分别为287bp和130bp。本方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪蓝耳病病毒弱毒疫苗病毒含量的测定。

公开(公告)号：CN104630365A

公开(公告)日：2015-05-20

申请号：CN201510064328.4

申请日：2015-02-09

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  秦波 ,  王生奎 ,  王清露 ,  史宪伟 ,  张辰宇 ,  柴俊 ,  柳桐 ,  王有涛

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/6883 ,  C12Q1/6827 ,  C12Q2600/156

Abstract: 本发明涉及一种用于检测奶牛结核病易感性的检测标靶及引物，属于生物医学技术领域。本发明通过所述引物对奶牛外周血基因组中BOLA-DRB3.2基因的多态性进行检测，并以所述SNP位点为标靶设计引物：上游：5’-CTCTGTCTGTTGAGCGAAGATG-3’，下游:5’-AGTCACGCATTGACAAAATCAC-3’，测定样品基因型，通过测定样品中上述基因的基因型来评估患结核病的风险，为实现对个体患结核病预警风险的评估提供一种方案，为奶牛结核病净化及抗结核健康奶牛种群选育提供一种方法。

公开(公告)号：CN103981189A

公开(公告)日：2014-08-13

申请号：CN201410211944.3

申请日：2014-05-20

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  柳桐 ,  史宪伟 ,  王生奎 ,  柴俊 ,  马志亮 ,  孙亭亭 ,  秦波 ,  王有涛

IPC: C12N15/12 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明属于分子生物学动物疾病诊断技术领域，具体涉及一种奶牛结核病候选基因CARD15基因及其功能突变检测方法。本发明提供的奶牛结核病候选基因CARD15基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所提供的奶牛结核病候选基因CARD15基因功能突变检测方法，采用上述奶牛结核病候选基因CARD15基因序列，与牛基因组序列比对，针对存在的变异，采用创造酶切位点PCR-RFLP法，用下述引物对奶牛的总DNA进行PCR扩增，然后用StyⅠ酶进行单核苷酸多态性检测，正向引物：5，CCCAGCCTGGCTAATTCACCCAAG3，,反向引物：5，TATTCCCTCAGCTCTCACCTCTAAC3，。本发明巧妙地利用创造酶切位点PCR-RFLP法检测SNPs，发现奶牛结核病候选基因CARD15基因的特异性突变位点。采用标记辅助选择是一大发展趋势。

公开(公告)号：CN103224996A

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN201310123401.1

申请日：2013-04-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  马志亮 ,  范斌 ,  柴俊 ,  孙亭亭 ,  邹丰才 ,  刘岳 ,  柳桐 ,  杨洁

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的方法, 属疫苗质量监测技术领域。本发明方法包括特异性引物及Taqman荧光探针的设计、RNA提取、cDNA制备、标准质粒构建、Taqman荧光定量PCR检测标准曲线的建立、有效性验证和结果判定。设计合成了两对引物，均能特异性扩增猪瘟兔化弱毒病毒的cDNA，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2扩增产物大小为197bp，用于构建标准浓度的质粒，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4扩增产物大小为143bp，包含于前述扩增产物197bp之内,加入荧光探针SEQ ID NO.5用于Taqman荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量。本发明方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的测定。