公开(公告)号：CN103224996A

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN201310123401.1

申请日：2013-04-10

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  马志亮 ,  范斌 ,  柴俊 ,  孙亭亭 ,  邹丰才 ,  刘岳 ,  柳桐 ,  杨洁

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的方法, 属疫苗质量监测技术领域。本发明方法包括特异性引物及Taqman荧光探针的设计、RNA提取、cDNA制备、标准质粒构建、Taqman荧光定量PCR检测标准曲线的建立、有效性验证和结果判定。设计合成了两对引物，均能特异性扩增猪瘟兔化弱毒病毒的cDNA，SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2扩增产物大小为197bp，用于构建标准浓度的质粒，SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4扩增产物大小为143bp，包含于前述扩增产物197bp之内,加入荧光探针SEQ ID NO.5用于Taqman荧光定量RT-PCR检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量。本发明方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的测定。

公开(公告)号：CN103290142A

公开(公告)日：2013-09-11

申请号：CN201310105226.3

申请日：2013-03-29

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  范斌 ,  马志亮 ,  刘旭川 ,  邹丰才 ,  柴俊 ,  刘岳 ,  柳桐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准曲线建立、有效性验证和结果判定。外侧引物（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2）用于构建标准质粒，内侧引物（SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4）用于样品检测，内侧引物扩增片段包含于外侧引物扩增片段之内，两对引物均能特异性扩增猪蓝耳病弱毒疫苗株病毒，扩增产物大小分别为287bp和130bp。本方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪蓝耳病病毒弱毒疫苗病毒含量的测定。

公开(公告)号：CN103290142B

公开(公告)日：2015-03-11

申请号：CN201310105226.3

申请日：2013-03-29

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 张以芳 ,  范斌 ,  马志亮 ,  刘旭川 ,  邹丰才 ,  柴俊 ,  刘岳 ,  柳桐

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测猪蓝耳病弱毒疫苗病毒含量的方法，属疫苗质量检测技术领域。该方法包括猪蓝耳病病弱毒疫苗病毒特异性引物设计、RNA提取、cDNA制备、实时荧光定量RT-PCR扩增、标准质粒构建及检测标准曲线建立、有效性验证和结果判定。外侧引物（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2）用于构建标准质粒，内侧引物（SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4）用于样品检测，内侧引物扩增片段包含于外侧引物扩增片段之内，两对引物均能特异性扩增猪蓝耳病弱毒疫苗株病毒，扩增产物大小分别为287bp和130bp。本方法检测灵敏度高，检测时间短，能同时进行大批量的样本分析，具有良好的敏感性、特异性、重复性，适用于各品牌猪蓝耳病病毒弱毒疫苗病毒含量的测定。