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公开(公告)号:CN110438265B
公开(公告)日:2022-12-16
申请号:CN201910745127.9
申请日:2019-08-13
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供一种基于探针导向的重组酶介导的等温扩增技术对非洲猪瘟病毒基因I型和II型的鉴别诊断方法,所述方法能够用于快速诊断和区分非洲猪瘟病毒基因I型和II型。所述基于探针导向的重组酶介导的等温扩增法检测不同基因型特异差异位点用探针,所述探针在重组酶介导的等温扩增法用探针的基础上,将四氢呋喃替换位点的后一位碱基或特异差异位点互补位点的后一位碱基,外切酶III酶解到四氢呋喃位点切割结束,切掉的荧光基团修饰的碱基在体系中产生荧光信号,余下的探针部分充当下游引物的作用。所述探针简化检测过程中必须下游引物组分,而将下游引物与探针组合使用,降低了探针与引物发生非特异性扩增。
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公开(公告)号:CN113186358B
公开(公告)日:2022-05-10
申请号:CN202110668447.6
申请日:2021-06-16
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供一种可同时检测羊痘病毒属牛结节性皮肤病、山羊痘与绵羊痘的Cycleave荧光PCR引物对、探针及应用该引物对和探针的检测方法。本发明所提供的引物对和探针组,其正向引物的序列为SEQID NO:1;反向引物的序列为SEQ ID NO:2;探针的序列为SEQ ID NO:3,且探针的第8位为RNA碱基。本发明所提供的Cycleave荧光PCR检测羊痘病毒属病毒的引物、探针及方法具有检测灵敏度高、特异性好、高通量和操作简便的优点。
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公开(公告)号:CN108866097A
公开(公告)日:2018-11-23
申请号:CN201810758404.5
申请日:2018-07-11
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: C12N15/863 , C12N15/65
Abstract: 本发明提供的转移载体pLSEG‑EG95的TK基因同源臂之间插入了EG95和两个筛选标记基因。所述的EG95基因开放阅读框(ORF)上游为p7.5K启动子,下游为ATTTTTAT早期转录终止信号。所述的转移载体使用了筛选标记eGFP基因,使得后期筛选更为便捷;又由于引入了gpt基因,较大程度降低了亲本病毒的污染,使重组病毒的纯化更为容易。
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公开(公告)号:CN104031998B
公开(公告)日:2017-09-01
申请号:CN201410246787.X
申请日:2014-05-30
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
Abstract: 本发明涉及一种PCR试剂盒中防止阳性对照污染待测样品的方法,通过具体分析阳性模板核酸序列,在特定条件下下将用做阳性对照的模板缩短50‑100bp左右的碱基,完成相关PCR反应后,通过琼脂糖凝胶电泳即可观察和区分出待检样品的阳性条带是真阳性还是因操作失误造成待检样品中污染阳性对照而产生的假阳性。本发明能不改变反应过程的情况下直观反映各种样品检测的真实信息,不会出现假阳性。
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公开(公告)号:CN103290143B
公开(公告)日:2014-10-22
申请号:CN201310156372.9
申请日:2013-04-28
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
Abstract: 本发明涉及一种用于禽肿瘤病检测的PCR复合参照物及其制备方法,及其用于检测禽肿瘤病的方法和试剂盒。本发明所涉及的DNA参照物可专门用于马立克氏病、禽白血病、禽网织内皮增生症的PCR检测,该参照物集中了这三种疾病的基因特征,可以代替这三种病毒的病原而作为检测所必需的参照样品。该PCR复合参照物既容易培养又具有生物安全性,可以解决这三种疾病的PCR诊断技术的困难问题。本发明具有一定的经济效益和社会效益。
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公开(公告)号:CN103952494A
公开(公告)日:2014-07-30
申请号:CN201410078254.5
申请日:2014-03-06
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12Q2531/119
Abstract: 本发明涉及一种裂谷热病毒RT-LAMP的检测方法检测过程中:步骤a,建立如下扩增反应体系:5μl RNA样品、2.5μl Bst DNA聚合酶缓冲液(10x)、1μl Bst DNA聚合酶(8U/μl)、1μl AMV反转录酶(10U/μl)、1μld NTP(25mmol/μl)、5μl Betaine(5μmol/μl)、1μl Mg SO4(100nmol/μl)、对应于L基因的四条引物各1μl引物浓度为F3与B3:5pmol/μl、BIP与FIP:70pmol/μl、H2O补足至25μl;步骤b,将上述各组分混匀后,在65℃水浴中反应1.5~2h;步骤c,用1.5%琼脂糖凝胶进行电泳,然后观察结果。本发明新型的RT-LAMP技术具有快速灵敏、操作简单,安全性高,价格低廉,不需要特殊仪器设备等优点,特别适用于基层检验检疫机构普及应用,为裂谷热病毒早期诊断提供了一种快速、使用的诊断方法。
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公开(公告)号:CN103290143A
公开(公告)日:2013-09-11
申请号:CN201310156372.9
申请日:2013-04-28
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
Abstract: 本发明涉及一种用于禽肿瘤病检测的PCR复合参照物及其制备方法,及其用于检测禽肿瘤病的方法和试剂盒。本发明所涉及的DNA参照物可专门用于马立克氏病、禽白血病、禽网织内皮增生症的PCR检测,该参照物集中了这三种疾病的基因特征,可以代替这三种病毒的病原而作为检测所必需的参照样品。该PCR复合参照物既容易培养又具有生物安全性,可以解决这三种疾病的PCR诊断技术的困难问题。本发明具有一定的经济效益和社会效益。
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公开(公告)号:CN111621580A
公开(公告)日:2020-09-04
申请号:CN202010544519.1
申请日:2020-06-15
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种RAA荧光法检测多杀性巴氏杆菌的引物、探针及检测方法,其中引物和探针适用于RAA荧光法检测,并且能够准确地检测出多杀性巴氏杆菌质粒和阳性样本,与支原体、链球菌、大肠杆菌、附红细胞体、新孢子虫、弓形虫、健康牛血液无交叉反应,特异性达100%;检测方法快速、容易实现高通量,同时降低了检测时间和检测成本,本发明提供的基于RAA荧光法快速检测多杀性巴氏杆菌DNA的方法,灵敏度高,每反应检测灵敏度达到10copies/μL。
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公开(公告)号:CN110951922A
公开(公告)日:2020-04-03
申请号:CN201911402509.8
申请日:2019-12-31
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心 , 江苏奇天基因生物科技有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种RAA荧光法检测亨德拉病毒的引物、探针及检测方法,其中引物和探针适用于RAA荧光法检测,并且能够准确地检测出亨德拉病毒质粒,与尼帕病毒质粒、马流感病毒、马动脉炎病毒和马传染性贫血病毒无交叉反应,特异性达100%;检测方法快速、容易实现高通量,同时降低了检测时间和检测成本,本发明提供的基于RAA荧光法快速检测亨德拉病毒的方法,灵敏度高,每反应检测灵敏度在95%的概率下达到39copies/反应。
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公开(公告)号:CN107663551A
公开(公告)日:2018-02-06
申请号:CN201610607882.7
申请日:2016-07-29
Applicant: 中国动物卫生与流行病学中心
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6869 , C12R1/93
CPC classification number: C12Q1/6869 , C12Q1/701 , C12Q2531/113 , C12Q2565/301 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明属于生物技术领域,它确立了小反刍兽疫病毒焦磷酸测序方法,含有三个技术要点:①确立了核酸检测所需要的引物序列;②确立了检测反应种类;③确立了检测反应体系和反应条件。该小反刍兽疫病毒磷酸测序方法可以用于小反刍兽疫病毒科学研究,也可以用于临床诊断检测。
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