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公开(公告)号:CN109609479A
公开(公告)日:2019-04-12
申请号:CN201811633720.6
申请日:2018-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种对映选择性提高的宇佐美曲霉环氧化物水解酶突变体,属于酶工程和生物催化技术领域。本发明基于理性设计对宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)环氧化物水解酶(AuEH2)进行分子改造,结合基因的定点饱和突变方法,获得多个对映选择性提高的环氧化物水解酶突变体。本发明获得的9个对映选择性提高的突变体催化外消旋对甲基苯基缩水甘油醚(rac-pMPGE)的对映体比率(E值)相比野生型,从12.7分别提高至32.4、31.1、27.8、25.8、23.5、22.4、20.2、14.1、13.6。
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公开(公告)号:CN109486789A
公开(公告)日:2019-03-19
申请号:CN201811653120.6
申请日:2018-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种立体选择性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体,属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶1(PvEH1)进行饱和突变,获得对映选择性与对映归一性(即立体选择性)提高的突变酶PvEH1 Z4X4-59。PvEH1 Z4X4-59对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac-mCSO)的最终eep,在25℃下从3.1%提高到92.3%,E值从2.6提高至26.5。
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公开(公告)号:CN108034644A
公开(公告)日:2018-05-15
申请号:CN201810033897.6
申请日:2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的L‑乳酸脱氢酶突变体及其构建方法,属于基因工程技术领域。本发明在L‑乳酸脱氢酶基础上,通过定点突变生物技术改造L‑乳酸脱氢酶分子结构,得到一株L‑乳酸脱氢酶大肠杆菌工程菌,突变酶比酶活提高6.1倍,催化活性提高4.2倍。本发明解决了L‑乳酸脱氢酶催化活性低的限制性问题,为L‑乳酸脱氢酶分子改造提供了一条新的思路。
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公开(公告)号:CN104450801B
公开(公告)日:2018-04-13
申请号:CN201410759167.6
申请日:2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌系统在不对称还原制备(R)‑2‑氯‑1‑(3‑氯苯基)乙醇中的应用。以含有羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组菌E.coil BL21(pETDuet‑Sygdh‑Sys1)为催化剂,并添加一定量的NADP+和葡萄糖,在缓冲溶液/二甲亚砜两相反应体系中实现不对称还原3‑氯苯酰甲基氯高效制备(R)‑2‑氯‑1‑(3‑氯苯基)乙醇。其收率为98%,产物的对映体过量(e.e.)>99%。
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公开(公告)号:CN107177569A
公开(公告)日:2017-09-19
申请号:CN201710474196.1
申请日:2017-06-21
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12P17/02 , C12P41/00 , C12Y303/02003
Abstract: 本发明公开了一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法,属于生物工程技术领域。本发明的菜豆环氧化物水解酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO:1,其氨基酸序列为SEQ ID NO:2。本发明还公开了PvEH4工程菌的构建以及重组PvEH4的活性测定的方法。以6mM消旋体环氧苯乙烷为底物,重组PvEH4工程菌全细胞催化,于25℃、220r/min反应4h时,获得(R)‑SO的对映体过量(ees)和产率分别为99.9%和32.1%,(R)‑PED的对映体过量(eep)和产率分别为92.7%和65.4%。
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公开(公告)号:CN104531729B
公开(公告)日:2017-06-13
申请号:CN201410758084.5
申请日:2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明的目的是提供一种阿魏酸酯酶A热稳定性改造、突变阿魏酸酯酶A工程菌构建以及突变阿魏酸酯酶A高效异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的空间结构设计突变A126C和N152C,得到突变阿魏酸酯酶A:AuFaeAA126C‑N152C,其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1,C126和C152可以形成一个二硫键。实验结果表明突变后该酶热稳定性有了明显的提高,为其它酶的改造提供新的技术路径,作为一种耐热型的酶制剂,该阿魏酸酯酶具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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公开(公告)号:CN105969837A
公开(公告)日:2016-09-28
申请号:CN201610535106.0
申请日:2016-07-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法制备(S)‑环氧苯乙烷的方法,属于生物催化技术领域。本发明在正己醇/缓冲液的双相体系中,利用来源于宇佐美曲霉的环氧化物水解酶催化外消旋环氧苯乙烷的水解动力学拆分,制备(S)‑环氧苯乙烷的方法;与单相反应体系相比,动力学拆分rac‑SO的浓度从24g/L提高至120g/L;时空产率从为3.1g/L/h提高至20.3g/L/h;动力学拆分120g/Lrac‑SO制备(S)‑SO的ee值从36.8%提高至98.3%,并实现了(S)‑SO的克级制备。本发明方法工艺简单、产物的对映体纯度和得率高、催化效率高和环境友好,具有较大工业化应用前景。
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公开(公告)号:CN104404109A
公开(公告)日:2015-03-11
申请号:CN201410758066.7
申请日:2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种酶法结合超滤工艺从魔芋精粉中制备低聚甘露糖的方法。利用重组β-甘露聚糖酶(reAuMan26A)对魔芋精粉进行酶解得到低聚甘露糖。该方法所用关键酶的催化活力较高,酶的生产和使用成本较低,生产周期短,无污染,纯化、分离步骤简便,极大地提高魔芋精粉的附加值,为进一步精制低聚甘露糖奠定理论基础,有较大的工业化生产、应用潜力和经济价值。
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公开(公告)号:CN104388412A
公开(公告)日:2015-03-04
申请号:CN201410757519.4
申请日:2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2482 , C12Y302/01008
Abstract: 本发明公开了一种N端替换提高米曲霉木聚糖酶热稳定性的方法。基于高性能计算机及其相关生物学软件对Aspergillus oryzae常温木聚糖酶AoXyn11A耐热性改造的理性设计,将AoXyn11A N端41个氨基酸替换成同一家族耐热木聚糖酶TfGH11 N端42个氨基酸,获得了一种耐热杂合木聚糖酶ATX11A,其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。该杂合酶基因ATx11A是采用大引物PCR技术由AoXyn11A和TfGH11基因的相应片段拼接而成的,其核苷酸序列为SEQ ID NO:2。将重组毕赤酵母GS115/ATx11A在30℃诱导72 h,期间每隔24 h添加1.0%(v/v)甲醇。表达的耐热杂合酶ATX11A的最适温度由AoXyn11A的50℃提高至65℃;在60℃处理1 h,ATX11A的半衰期由AoXyn11A的1.3 min延长至55 min。
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公开(公告)号:CN102994531A
公开(公告)日:2013-03-27
申请号:CN201210562588.0
申请日:2012-12-24
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种截短的甘露聚糖酶的设计与制备。本发明提出了一种催化效率和表达水平较高的dAus Man5A截短酶的设计与构建的方法,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1,氨基酸序列为SEQ ID NO:2,相应的基因命名为dAusman5A。本发明还公开了截短酶工程菌的构建以及高效表达的方法,制备的截短酶具有表达水平和催化效率高的特性,具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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