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公开(公告)号：CN108048429B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201810033898.0
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及构建方法，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。W102L对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac‑mCSO)的最终eep，在25℃下从3.1％提高到81.7％。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。
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公开(公告)号：CN109652354A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811619444.8
申请日：2018-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种重组大肠杆菌制备(R)-对氯环氧苯乙烷的方法，属于生物技术领域。本发明将番茄来源的环氧化物水解酶在大肠杆菌中表达，构建了基因工程菌E.coli/sleh1，并利用该菌株表达制备重组环氧化物水解酶；提供了一种利用在本发明中构建的重组菌株发酵所产酶进行生物催化的方法，催化150mM外消旋对氯环氧苯乙烷制备得到对映纯的(R)-对氯环氧苯乙烷(ee>98％)，并且，其最终产率达到47.5％，接近理论值50％。
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公开(公告)号：CN106244637A
公开(公告)日：2016-12-21
申请号：CN201610926649.5
申请日：2016-10-31
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P7/22
Abstract: 本发明公开了一种双酶催化外消旋环氧苯乙烷制备(R)-苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以外消旋环氧苯乙烷(rac-SO)为底物，以双环氧化物水解酶：环氧化物水解酶突变体AuEH2A250I和环氧化物水解酶VrEH3对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷(rac-SO)制备高对映纯产物(R)-苯乙二醇(PED)。本发明是首次把来源于绿豆的VrEH3和来源于宇佐美曲霉的AuEH2A250I结合对映归一性水解rac-SO。催化10mM rac-SO制备(R)-PED的ee值为96.0％。具有适合于工业应用的理想特性，本发明为该酶的产业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN106244637B
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201610926649.5
申请日：2016-10-31
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种双酶催化外消旋环氧苯乙烷制备(R)‑苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以外消旋环氧苯乙烷(rac‑SO)为底物，以双环氧化物水解酶：环氧化物水解酶突变体AuEH2A250I和环氧化物水解酶VrEH3对映归一性水解外消旋环氧苯乙烷(rac‑SO)制备高对映纯产物(R)‑苯乙二醇(PED)。本发明是首次把来源于绿豆的VrEH3和来源于宇佐美曲霉的AuEH2A250I结合对映归一性水解rac‑SO。催化10mM rac‑SO制备(R)‑PED的ee值为96.0％。具有适合于工业应用的理想特性，本发明为该酶的产业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN107177569A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710474196.1
申请日：2017-06-21
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12P17/02 , C12P41/00 , C12Y303/02003
Abstract: 本发明公开了一种菜豆环氧化物水解酶及其异源表达方法，属于生物工程技术领域。本发明的菜豆环氧化物水解酶基因核苷酸序列为SEQ ID NO:1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2。本发明还公开了PvEH4工程菌的构建以及重组PvEH4的活性测定的方法。以6mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组PvEH4工程菌全细胞催化，于25℃、220r/min反应4h时，获得(R)‑SO的对映体过量(ees)和产率分别为99.9％和32.1％，(R)‑PED的对映体过量(eep)和产率分别为92.7％和65.4％。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109880876B
公开(公告)日：2021-03-30
申请号：CN201811620616.3
申请日：2018-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)‑间硝基苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以表达有环氧化物水解酶PvEH2的大肠杆菌全细胞为催化剂，根据其针对外消旋间硝基环氧苯乙烷的优良的立体选择性特性，通过建立一种双相体系——石油醚/水，提高了底物的初始上样浓度和整个催化反应的效率，减轻了单水相体系中高浓度的间硝基环氧苯乙烷对于PvEH2活性的抑制，同时降低了底物自发水解的程度，产物邻二醇的对映体纯度(eep)可达90.2％，底物的转化率可达99.5％。
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公开(公告)号：CN106282257A
公开(公告)日：2017-01-04
申请号：CN201610938662.2
申请日：2016-10-31
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P17/02
Abstract: 本发明公开了一种双相多酶偶联体系高效制备(S)-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷的方法，属于生物工程技术领域。本发明以含羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组大肠杆菌BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)为催化剂，并添加一定量的NADP+和葡萄糖，在磷酸钾缓冲液/异丁醇两相反应体系中实现双酶偶联催化α-溴代对硝基苯乙酮高效制备中间产物(S)-2-溴-1-(4-硝基苯基)乙醇，其摩尔产率可达99.8％。继续向反应体系中添加破碎SyHheC粗酶液和缓冲液，反应得到产物(S)-2-(4-硝基苯基)环氧乙烷摩尔产率可达99.9％，e.e.值＞99％。
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公开(公告)号：CN109880876A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201811620616.3
申请日：2018-12-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)-间硝基苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以表达有环氧化物水解酶PvEH2的大肠杆菌全细胞为催化剂，根据其针对外消旋间硝基环氧苯乙烷的优良的立体选择性特性，通过建立一种双相体系——石油醚/水，提高了底物的初始上样浓度和整个催化反应的效率，减轻了单水相体系中高浓度的间硝基环氧苯乙烷对于PvEH2活性的抑制，同时降低了底物自发水解的程度，产物邻二醇的对映体纯度(eep)可达90.2％，底物的转化率可达99.5％。
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公开(公告)号：CN108048429A
公开(公告)日：2018-05-18
申请号：CN201810033898.0
申请日：2018-01-15
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2497 , C12N15/75
Abstract: 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及构建方法，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。W102L对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac‑mCSO)的最终eep，在25℃下从3.1％提高到81.7％。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。
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公开(公告)号：CN107164342A
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201710474254.0
申请日：2017-06-21
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12P17/02 , C12P41/001 , C12Y303/02
Abstract: 本发明公开了一种菜豆来源的环氧化物水解酶及其应用，属于生物技术领域。本发明公布了一种来源于豆科植物菜豆(Phaseolus vulgaris)的环氧化物水解酶基因(pveh2)及对应的氨基酸序列；提供了含有该基因的重组质粒pET28a(+)‑pveh2和基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)‑pveh2，并利用该菌株表达制备重组环氧化物水解酶；提供了一种利用在本发明中构建的重组菌株发酵所产酶进行生物催化的方法，制备得到对映纯的R型环氧苯乙烷(ee>99％)，并且，其最终产率达到49.3％，接近理论值50％。
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