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公开(公告)号：CN104388450A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758794.8
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种源自嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)GH11耐热木聚糖酶的密码子优化基因在大肠杆菌中表达、活性测定和酶学性质分析的方法。其基因命名为Syxyl11，它的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，编码的蛋白质为SyXyl11，氨基酸序列为SEQ ID NO:2。该酶活性为47.5U/mL；其最适反应温度为70℃，70℃下保温60min，残余酶活为78.3％，表明该酶的热稳定性比较好；其最适pH为6.0，在pH5.0～8.0范围内较稳定；金属离子对该酶活性影响较小。这为该酶的产业化生产奠定了理论基础，有较大的工业化应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN104531630B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104531728A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410755394.1
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的一种环氧化物水解酶cDNA基因序列的克隆方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，命名为Aueh1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，该酶命名为AuEH1。本发明还公开了AuEH1工程菌的构建以及重组AuEH1的异源表达和活性测定的方法。以20mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组AuEH1工程菌全细胞催化，获得(S)-SO的对映体过量率ee>94％。AuEH1具有较高的催化活性和手性选择性，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN104531630A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/14 , C12Y303/02003
Abstract: 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104450801A
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201410759167.6
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P7/22
Abstract: 本发明公开了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌系统在不对称还原制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇中的应用。以含有羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组菌E.coil BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)为催化剂，并添加一定量的NADP+和葡萄糖，在缓冲溶液/二甲亚砜两相反应体系中实现不对称还原3-氯苯酰甲基氯高效制备(R)-2-氯-1-(3-氯苯基)乙醇。其收率为98％，产物的对映体过量(e.e.)>99％。
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公开(公告)号：CN104388373A
公开(公告)日：2015-03-04
申请号：CN201410758942.6
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0006 , C12N15/70 , C12Y101/01184 , C12Y101/9901
Abstract: 本发明提供了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的重组菌E.coil BL21(pETDuet-Sygdh-Sys1)，并且公开了其构建方法。其SyS1酶活力为3.7U/g，SyGDH酶活力为44.1U/g。它避免了添加昂贵的纯酶和辅酶NADPH，只需添加低成本的辅酶NADP+就可以使得辅酶NADPH高效再生，大大降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN103627808A
公开(公告)日：2014-03-12
申请号：CN201310666359.8
申请日：2013-12-10
Applicant: 江南大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/686 , C12Q1/6848 , C12Q2521/301 , C12Q2525/301 , C12Q2549/119
Abstract: 本发明是一种利用限制性内切酶、T-发卡结构(HSO-T)和巢式PCR扩增等技术，基于已知DNA序列扩增其5′或3′端侧翼未知序列的方法。该方法设计一条HSO-T的寡聚核苷酸序列；用单一限制性内切酶酶切基因组DNA并经rTaq或Ex Taq修饰；HSO-T接头与修饰后基因组连接；根据HSO-T序列合成引物THSO-F，根据已知DNA序列合成2条下游引物或2条上游引物；以连接物为模板，引物THSO-F和2条下游引物进行巢式PCR扩增获得5′端未知序列；同理，引物HSO-F和2条上游引物进行巢式PCR获得3′端未知序列。该技术操作简便、应用范围广、成本低廉、高效准确等优点，具有广阔应的用前景。
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公开(公告)号：CN104450801B
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201410759167.6
申请日：2014-12-10
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种共表达羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的大肠杆菌系统在不对称还原制备(R)‑2‑氯‑1‑(3‑氯苯基)乙醇中的应用。以含有羰基还原酶(SyS1)基因和葡萄糖脱氢酶(SyGDH)基因的共表达重组菌E.coil BL21(pETDuet‑Sygdh‑Sys1)为催化剂，并添加一定量的NADP+和葡萄糖，在缓冲溶液/二甲亚砜两相反应体系中实现不对称还原3‑氯苯酰甲基氯高效制备(R)‑2‑氯‑1‑(3‑氯苯基)乙醇。其收率为98％，产物的对映体过量(e.e.)>99％。
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公开(公告)号：CN103642768A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310666412.4
申请日：2013-12-10
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12N15/815 , C12Y301/01072
Abstract: 本发明提出了一种源于Aspergillus usamii E001的新型乙酰木聚糖酯酶成熟肽cDNA序列的克隆及表达方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，相应的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，相应的基因命名为Auaxe。本发明还公开了产乙酰木聚糖酯酶工程菌的构建以及重组乙酰木聚糖酯酶的高效表达方法，该酶能有效地消除乙酰基团对木聚糖酶作用时的空间阻碍作用，在提高纤维资源的生物降解性，开发为饲料酶制剂投入工业化生产及生物漂白等方面显示出良好的效果，具有较大的工业化生产潜力和经济价值。
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