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公开(公告)号：CN106676199A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710027687.1
申请日：2017-01-16
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2531/125
Abstract: 本发明公开了一种用于检测犬圆环病毒的引物和高效CL‑RCA‑PCR检测试剂盒及方法，所述引物为DogCV‑D‑F：GTGCTTCACCATCAATAATCCTACT和DogCV‑D‑R：AGACTGAGCCGCCGATAGAG；所述试剂盒中包含上述引物。本发明中犬腹泻物样本仅采用DogCV引物PCR方法进行检测。该引物、CL‐RCA‐PCR试剂盒及检测方法的准确性高、特异性强、灵敏性高。
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公开(公告)号：CN106399371A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/8509 , A01K2217/05 , A01K2227/105 , A01K2267/03
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV-LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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公开(公告)号：CN103114079B
公开(公告)日：2014-06-11
申请号：CN201310028775.5
申请日：2013-01-25
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N9/14 , C07K16/40 , G01N33/569 , C12N5/076
Abstract: 本发明公开了血清学H-Y抗原基因DBY抗体制备及其XY精子免疫分选法。利用生物信息学方法预测并筛选出血清学H-Y抗原基因DBY的3个B细胞表位抗原肽，连接、重组、原核表达，得到了高纯度的DBY重组抗原肽。以重组抗原肽为抗原免疫新西兰大白兔，获得效价高、特异性强的多克隆抗体。利用DBY抗体结合流式细胞技术分选出约63.2±4.5%精子。本发明建立了以血清学H-Y抗原基因DBY抗体为基础的X和Y精子的免疫分选法，利用该抗体来分离X和Y精子，可建立简单、高效、安全的性别选择的理想方法，可更好地控制种用品种（或品种）的遗传改良，获得更快的遗传进展和畜牧业生产与管理的效率优势。
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公开(公告)号：CN103114079A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201310028775.5
申请日：2013-01-25
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N9/14 , C07K16/40 , G01N33/569 , C12N5/076
Abstract: 本发明公开了血清学H-Y抗原基因DBY抗体制备及其XY精子免疫分选法。利用生物信息学方法预测并筛选出血清学H-Y抗原基因DBY的3个B细胞表位抗原肽，连接、重组、原核表达，得到了高纯度的DBY重组抗原肽。以重组抗原肽为抗原免疫新西兰大白兔，获得效价高、特异性强的多克隆抗体。利用DBY抗体结合流式细胞技术分选出约63.2±4.5%精子。本发明建立了以血清学H-Y抗原基因DBY抗体为基础的X和Y精子的免疫分选法，利用该抗体来分离X和Y精子，可建立简单、高效、安全的性别选择的理想方法，可更好地控制种用品种（或品种）的遗传改良，获得更快的遗传进展和畜牧业生产与管理的效率优势。
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公开(公告)号：CN119307595A
公开(公告)日：2025-01-14
申请号：CN202411393650.7
申请日：2024-10-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/70 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种LAMP‑CRISPR检测体系及其应用。所述LAMP‑CRISPR检测体系包括LAMP扩增体系和CRISPR检测体系，所述LAMP扩增体系包括特异性扩增PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV G9的引物；CRISPR检测体系包括Cas蛋白、crRNA‑F/R和ssDNA探针；所述crRNA‑F/R序列如SEQ ID NO.23‑28、SEQ ID NO.29‑34、SEQ ID NO.35‑40或SEQ ID NO.41‑42所示；ssDNA探针的序列如SEQ ID NO.43‑44所示。本发明通过体系的优化，有效解决了多重检测体系检测的准确度不高的问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114773483B
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202210058058.6
申请日：2022-01-19
Applicant: 湖南农业大学 , 湖南普简生物科技有限公司
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , C12N15/66 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白，由非洲猪瘟病毒CD2v蛋白与MGF360‑505R蛋白的B细胞表位以柔性肽串联后形成，该串联表位蛋白的表达量与包涵体含量更高，且具有一定的可溶性，与血清抗体具有反应性，能够用于抗体ELISA的检测。还公开了该非洲猪瘟病毒抗原重组串联表位蛋白的构建方法、在抗体ELISA检测中的应用及抗体ELISA检测试剂盒。本发明的应用和抗体ELISA检测试剂盒，特异性良好，重复性与稳定性好，灵敏度高，能准确识别ASFV野生型和CD2v基因缺失型毒株免疫后产生的血清样本，对ASF检测具有一定的参考价值，基于保守表位的血清学检测方法有望提供更广泛的诊断范围。
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公开(公告)号：CN108410907B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)‑2A‑Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR‑gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN109265521B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201811067175.9
申请日：2018-09-13
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C07K14/01 , C07K19/00 , C12N15/11 , C12N15/70 , G01N33/68 , G01N33/569 , A61K39/12 , A61K39/23 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了一种PCV2Loop EF区的突变体、引物及其制备方法和应用，PCV2Loop EF区的突变体，其Loop EF区第133位丙氨酸形成供外源表位替换和/或插入的可突变位点以便在体外组装成完整的VLPs。电镜结果表明，Loop EF中第133位氨基酸的突变不影响VLPs组装，表明PCV2VLPs Loop EF区展示外源抗原表位具有可行性。为Loop EF区结构功能研究奠定基础，同时也为展示外源表位构建嵌合型多价疫苗研究提供重要的实验依据。
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公开(公告)号：CN106434750A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N2800/107 , C12N2800/30
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN105907752A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610300662.X
申请日：2016-05-09
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/11 , C12N7/00 , C12N15/10 , C12N2750/10052 , C12Q2531/125
Abstract: 本发明公开一种基于体外滚环复制的PCV2毒株感染性克隆构建试剂盒及方法。所述基于体外滚环复制的PCV2毒株感染性克隆构建试剂盒中含有如下引物：PCV2特异性上游引物：5’?CCATATGAAATAAATTACTGAG?3’（SEQ ID NO.1）；PCV2特异性下游引物：5’?CAGCGCACTTCTTTCGTTTTCAG?3’（SEQ ID NO.2）；随机引物：5′?NNNNNN?3′（SEQ ID NO.3）。PCV2毒株感染性克隆的方法是利用上述引物对PCV2 DNA进行多引物滚环扩增后得到PCV2全基因组，然后将全基因组通过单酶切分离纯化后连接，并重新环化，构建成PCV2毒株感染性克隆。
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