公开(公告)号：CN108410907B

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN201810192797.8

申请日：2018-03-08

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 王爱兵 ,  刘谭彬 ,  郭时印 ,  谭磊 ,  雷新诺 ,  王乃东 ,  胡意 ,  李亚兰 ,  杨凌宸 ,  杨毅

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)‑2A‑Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR‑gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。

公开(公告)号：CN112813110A

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN202110244694.3

申请日：2021-03-05

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 程安玮 ,  罗凯云 ,  崔文玉 ,  丰程凤 ,  夏智慧 ,  郭时印 ,  吴卫国

IPC: C12P7/22 ,  C12P7/42 ,  A23L33/105

Abstract: 本发明属于食品精加工领域，具体提供一种果蔬中不可萃取多酚的制备方法，本发明通过果胶酶和单宁酶复合酶解的作用，将NEPP从果胶中释放出来，并通过单宁酶转换成方便提取的多酚，本发明多酚提取率高，方法简单，不需要辅以酸碱。危害小，污染物少，适合操作以及大规模工业化生产。

公开(公告)号：CN102719485B

公开(公告)日：2018-03-23

申请号：CN201210223516.3

申请日：2012-07-02

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 郭时印

IPC: C12P7/06 ,  C12R1/69 ,  C12R1/845

CPC classification number: Y02E50/17

Abstract: 将罗汉果块根洗净、切片、绞碎、石油醚萃取、糖化过滤、生物发酵、蒸馏得乙醇成品。本发明方法操作简单，极大的降低了乙醇的生产成本，简化了生产过程；大大提高了罗汉果块根中淀粉的利用率，节约了淀粉资源。本发明所用的试剂均为无毒、廉价、量产的化学试剂，整个过程中可利用成熟的试剂回收常规技术，这极大地降低了向环境排放废弃物。

公开(公告)号：CN110200083A

公开(公告)日：2019-09-06

申请号：CN201910646752.8

申请日：2019-07-17

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 郭时印 ,  赵海洋 ,  曾朝喜 ,  夏会平 ,  唐忠海

IPC: A23D7/005 ,  A23D7/04

Abstract: 本发明涉及食品加工技术领域，公开了一种凝胶油基人造奶油及其制备方法。该人造奶油的原料以质量份计包括：0.1-0.8份卵清蛋白、0.5-2份黄原胶、5-25份脱脂乳粉、5-65份油脂和35-95份水，制备方法包括以下步骤：(1)将卵清蛋白与水混合，搅拌至卵清蛋白完全溶解后，静置使蛋白质充分水合，得到水合卵清蛋白溶液；(2)将脱脂乳粉与水混合，搅拌至脱脂乳粉完全溶解形成脱脂乳粉溶液，再将所述脱脂乳粉溶液、黄原胶和水合卵清蛋白溶液混合，搅拌至黄原胶完全溶解，得到卵清蛋白-黄原胶-脱脂乳粉体系；(3)将油脂与卵清蛋白-黄原胶-脱脂乳粉体系混合，搅拌后进行乳化均质，即得。该人造奶油的油脂含量低，有效保留原料中的营养成分，对人体健康有益。

公开(公告)号：CN108410907A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810192797.8

申请日：2018-03-08

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 王爱兵 ,  刘谭彬 ,  郭时印 ,  谭磊 ,  雷新诺 ,  王乃东 ,  胡意 ,  李亚兰 ,  杨凌宸 ,  杨毅

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10

Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)-2A-Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR-gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。

公开(公告)号：CN101914164B

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：CN201010246917.1

申请日：2010-08-06

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 郭时印 ,  唐忠海

IPC: C08B37/00 ,  A61K31/715 ,  A61P3/10

Abstract: 本发明主要涉及一种从桑叶中提取桑叶多糖在预防和治疗糖尿病中的应用，该方法主要涉及天然药物应用领域。粉碎干燥桑叶10kg，加入180L蒸馏水，70℃加热回流提取90min，三层纱布过滤两次，再用陶瓷膜过滤，减压浓缩至10L，然后浓缩液用10％三氯乙酸除蛋白，上SEPHADEX G-10柱分离收集含有桑叶多糖组分，浓缩至1L再上硅胶柱分离收集桑叶多糖成分浓缩至于，获得桑叶多糖，其中桑叶多糖含量在95.5％。