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公开(公告)号：CN115094060A
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202210727672.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12a可视化检测PCV2核酸的试剂盒，包括CRPSPR‑Cas12检测体系和LAMP扩增引物，是将LAMP检测方法和CRPSPR‑Cas12检测方法相结合，建立的可实现猪圆环病毒2型核酸可视化检测方法。本检测方法具有优良的特异性、灵敏性和可重复性，且操作简便，无需昂贵的仪器设备，并具有可视化优势，将该检测方法向猪场及检测单位推广应用，有利于实现猪圆环病毒2型相关病的快速诊断。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108410907B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)‑2A‑Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR‑gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN106434750A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N2800/107 , C12N2800/30
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN115094060B
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202210727672.7
申请日：2022-06-23
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/113 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种基于LAMP‑CRISPR/Cas12a可视化检测PCV2核酸的试剂盒，包括CRPSPR‑Cas12检测体系和LAMP扩增引物，是将LAMP检测方法和CRPSPR‑Cas12检测方法相结合，建立的可实现猪圆环病毒2型核酸可视化检测方法。本检测方法具有优良的特异性、灵敏性和可重复性，且操作简便，无需昂贵的仪器设备，并具有可视化优势，将该检测方法向猪场及检测单位推广应用，有利于实现猪圆环病毒2型相关病的快速诊断。
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公开(公告)号：CN108410907A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)-2A-Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR-gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN106434750B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV‑LoxP MAI2L‑MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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