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公开(公告)号：CN106399371B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV‑LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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公开(公告)号：CN108410907A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)-2A-Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR-gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN106676199A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710027687.1
申请日：2017-01-16
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2531/125
Abstract: 本发明公开了一种用于检测犬圆环病毒的引物和高效CL‑RCA‑PCR检测试剂盒及方法，所述引物为DogCV‑D‑F：GTGCTTCACCATCAATAATCCTACT和DogCV‑D‑R：AGACTGAGCCGCCGATAGAG；所述试剂盒中包含上述引物。本发明中犬腹泻物样本仅采用DogCV引物PCR方法进行检测。该引物、CL‐RCA‐PCR试剂盒及检测方法的准确性高、特异性强、灵敏性高。
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公开(公告)号：CN106399371A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/8509 , A01K2217/05 , A01K2227/105 , A01K2267/03
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV-LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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公开(公告)号：CN110724662A
公开(公告)日：2020-01-24
申请号：CN201910728019.0
申请日：2019-08-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/071 , A61K31/198 , A61P39/06 , A23K20/142
Abstract: 本发明提供了L-硒代蛋氨酸在动物细胞抗氧化中应用的方法及其产品，涉及动物细胞培养技术领域。该方法向动物细胞的培养体系中加入L-硒代蛋氨酸工作液，使动物细胞的培养体系中L-硒代蛋氨酸的终浓度为0.5-1.5μM；L-硒代蛋氨酸工作液的浓度为5-15μM。该L-硒代蛋氨酸在动物细胞抗氧化中应用的方法缓解了现有技术缺乏一种有效降低细胞氧化损伤，维持细胞活性，对细胞毒性低，操作简便，成本低的动物细胞抗氧化方法。本发明还提供了包含L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂及包含L-硒代蛋氨酸或L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂的动物细胞培养基，包含L-硒代蛋氨酸或L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂的药品或饲料添加剂。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106434750B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV‑LoxP MAI2L‑MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN118161130A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410426813.0
申请日：2024-04-10
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明涉及治疗效果评估技术领域，公开了一种胃旁路手术对猫糖尿病治疗效果评估方法。本发明一种胃旁路手术对猫糖尿病治疗效果评估方法，是从临床、血糖检测、果糖胺检测、生化检测以及糖代谢角度进行评估。本发明一种胃旁路手术对猫糖尿病治疗效果评估方法，能够准确、简单、有效地评估胃旁路手术是否成功治疗猫糖尿病。
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公开(公告)号：CN108410907B
公开(公告)日：2021-08-27
申请号：CN201810192797.8
申请日：2018-03-08
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas9技术实现HMGCR基因敲除的方法，是设计两个针对HMGCR基因的CRISPR/Cas9靶标序列，体外合成gRNA单链，经过退火处理获得两个gRNA双链DNA目的插入片段，并分别插入PX459(pSpCas9(BB)‑2A‑Puro)V2.0载体中，获得靶向HMGCR基因两个不同位点的质粒；分别转染该两质粒至PK15细胞中，以嘌呤霉素处理细胞，提取处理后的细胞基因组DNA进行PCR扩增，PCR产物变性、退火后再利用T7E1进行HMGCR基因敲除鉴定。本方法能用于分析HMGCR基因敲除后的序列和mRNA表达情况，能利用PCR结合T7E1酶处理方法验证有无脱靶现象，从而确定基于靶标序列HMGCR‑gRNA的特异性。本方法不仅可应用于细胞、动物模型中实现HMGCR基因的定点敲除，而且对于实现其它基因的敲除具有参考价值，并具有效果好、简便、经济、时间短等优点。
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公开(公告)号：CN110724661A
公开(公告)日：2020-01-24
申请号：CN201910644544.4
申请日：2019-07-17
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明提供了一种小鼠原代肝细胞的分离方法及其制得的小鼠原代肝细胞与应用，涉及原代细胞分离技术领域。小鼠原代肝细胞的分离方法，包括如下步骤：将麻醉小鼠依次进行腹腔暴露、肝周管结扎、原位三步灌流和细胞分离得到小鼠原代肝细胞；原位三步灌流依次包括第一灌流，第二灌流和第三灌流；第一灌流，用第一灌流液去除红细胞，并对血液进行抗凝；第二灌流，用第二灌流液去除抗凝剂，并对肝组织进行初步消化；第三灌流，用第三灌流液进一步消化。该小鼠原代肝细胞的分离方法缓解了现有技术中缺乏一种分离后细胞活性高、贴壁迅速、存活细胞收率高、分离成本低并且分离过程不易污染的小鼠原代肝细胞分离方法的技术问题。
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公开(公告)号：CN106434750A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N2800/107 , C12N2800/30
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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