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公开(公告)号：CN106591481A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201710061756.0
申请日：2017-01-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供一种可用于检测猪萨姆氏后圆线虫的特异性引物，特异性引物包括上游引物MsJB3F和下游引物MsJB4.5R，Ms JB3F的核苷酸序列为5'‑GAAAGAATTCATGAATTCAAAATT‑3'，Ms JB4.5R的核苷酸序列为5'‑GAAATTYATATTGTATTTAATTTTTG‑3'。本发明还提供一种可用于检测猪萨姆氏后圆线虫的检测试剂盒，检测试剂盒包括用于对样品DNA进行裂解的DNA裂解液、对样品DNA进行扩增的PCR反应液、以及引物混合液，引物混合液包括前述的特异性引物。本发明还提供一种前述的特异性引物在检测猪萨姆氏后圆线虫的应用。本发明提供的特异性引物和检测试剂盒具有特异性高、检测效率高、保存时间长的特点。
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公开(公告)号：CN106399371B
公开(公告)日：2019-07-26
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV‑LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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公开(公告)号：CN110724662A
公开(公告)日：2020-01-24
申请号：CN201910728019.0
申请日：2019-08-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/071 , A61K31/198 , A61P39/06 , A23K20/142
Abstract: 本发明提供了L-硒代蛋氨酸在动物细胞抗氧化中应用的方法及其产品，涉及动物细胞培养技术领域。该方法向动物细胞的培养体系中加入L-硒代蛋氨酸工作液，使动物细胞的培养体系中L-硒代蛋氨酸的终浓度为0.5-1.5μM；L-硒代蛋氨酸工作液的浓度为5-15μM。该L-硒代蛋氨酸在动物细胞抗氧化中应用的方法缓解了现有技术缺乏一种有效降低细胞氧化损伤，维持细胞活性，对细胞毒性低，操作简便，成本低的动物细胞抗氧化方法。本发明还提供了包含L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂及包含L-硒代蛋氨酸或L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂的动物细胞培养基，包含L-硒代蛋氨酸或L-硒代蛋氨酸的动物细胞抗氧化剂的药品或饲料添加剂。
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公开(公告)号：CN106434750B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV‑LoxP MAI2L‑MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN110724661A
公开(公告)日：2020-01-24
申请号：CN201910644544.4
申请日：2019-07-17
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明提供了一种小鼠原代肝细胞的分离方法及其制得的小鼠原代肝细胞与应用，涉及原代细胞分离技术领域。小鼠原代肝细胞的分离方法，包括如下步骤：将麻醉小鼠依次进行腹腔暴露、肝周管结扎、原位三步灌流和细胞分离得到小鼠原代肝细胞；原位三步灌流依次包括第一灌流，第二灌流和第三灌流；第一灌流，用第一灌流液去除红细胞，并对血液进行抗凝；第二灌流，用第二灌流液去除抗凝剂，并对肝组织进行初步消化；第三灌流，用第三灌流液进一步消化。该小鼠原代肝细胞的分离方法缓解了现有技术中缺乏一种分离后细胞活性高、贴壁迅速、存活细胞收率高、分离成本低并且分离过程不易污染的小鼠原代肝细胞分离方法的技术问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106591482A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201710061757.5
申请日：2017-01-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6888
Abstract: 本发明提供一种可用于检测猪复阴后圆线虫的特异性引物，特异性引物包括上游引物MpJB3 F和下游引物MpJB4.5 R，MpJB3 F的核苷酸序列为5'‑ACTCGCATATATTTGTATAATATATG‑3'，MpJB4.5 R的核苷酸序列为5'‑TTTCATTCATCGACGCAAAATTCAT‑3'。本发明还提供一种可用于检测猪复阴后圆线虫的检测试剂盒，检测试剂盒包括用于对样品DNA进行裂解的DNA裂解液、对样品DNA进行扩增的PCR反应液、以及引物混合液，引物混合液包括前述的特异性引物。本发明还提供一种前述的特异性引物在检测猪复阴后圆线虫的应用。本发明提供的特异性引物和检测试剂盒具有特异性高、检测效率高、保存时间长的特点。
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公开(公告)号：CN106434750A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610850055.0
申请日：2016-09-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N2800/107 , C12N2800/30
Abstract: 本发明公开了靶向打靶载体及靶向整合外源基因至MYH9Intron2位点构建小鼠胚胎干细胞株的方法和应用。所述靶向打靶载体序列如SEQ ID NO.7所示，命名为mpNTKV-LoxP MAI2L-MAI2R载体。本发明提供了一个新的能实现高效、安全、靶向整合的位点序列，基于该位点构建的靶向插入外源基因的打靶载体，不仅可实现高效打靶，而且能够保证外源基因在小鼠胚胎干细胞中稳定表达而内源基因表达不受影响，从而为构建转基因细胞系以及小鼠搭建了一个好的平台。
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公开(公告)号：CN108342490A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201810345262.X
申请日：2018-04-17
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种检测曼氏迭宫绦虫的引物组、试剂盒及其使用方法，其中，引物组包括：外引物cox1-F3：TTTACTGTGGGGTTGGAC；外引物cox1-B3：CAAGCAGAAAGAATTATACCAGT；内引物cox1-FIP：ACCTTTATACCCGTGGGAACCGAATTCAGACTGCTGTTTTCTTTAGTTCT；内引物cox1-BIP：AATAGTCGTGTTTCGTTGCGTGAATTCCACCCATAGTAAACAACACAAT；上述引物对应的目的基因为曼氏迭宫绦虫DNA中的cox1基因片段。该引物组、试剂盒及其使用方法灵敏度高、特异性高、操作简单便捷。
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公开(公告)号：CN106868115A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710061745.2
申请日：2017-01-26
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12Q1/6888 , C12Q2600/158
Abstract: 本发明提供一种可用于检测猪长刺后圆线虫的特异性引物，特异性引物包括上游引物MeJB3 F和下游引物MeJB4.5 R，MeJB3 F的核苷酸序列为：5'‑TGAAAGAATTCATGAATTGAAAACG‑3'，MeJB4.5 R的核苷酸序列为：5'‑AGATTTCATATTGTATTTAATTTTTG‑3'。本发明还提供一种可用于检测猪长刺后圆线虫的检测试剂盒，检测试剂盒包括用于对样品DNA进行裂解的DNA裂解液、对样品DNA进行扩增的PCR反应液、以及引物混合液，引物混合液包括前述的特异性引物。本发明还提供一种前述的特异性引物在检测猪长刺后圆线虫的应用。本发明提供的特异性引物和检测试剂盒具有特异性高、检测效率高、保存时间长的特点。
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公开(公告)号：CN106399371A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610823307.0
申请日：2016-09-14
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/8509 , A01K2217/05 , A01K2227/105 , A01K2267/03
Abstract: 本发明提供了一种构建基因替代小鼠研究野生型和突变体非肌性肌球蛋白重链II功能的方法。本发明改造的mpNTKV-LoxP载体更适合于构建基因打靶载体特别是基因替代目的，新加入的Pac I和Swa I都是识别八个碱基的限制性内切酶，有利于较大DNA片段的插入。构建的MYH9基因替代(即内源MYH9基因被外源编码非肌性肌球蛋白重链II基因所替代)打靶载体通过电转导入小鼠ES细胞中，经过药物筛选，ES细胞单克隆挑选，Southern Blot或PCR鉴定，发生同源重组的阳性单克隆细胞率高达90％以上，易于获得所需细胞系。使用阳性ES细胞显微注射至小鼠囊胚获得MYH9基因替代嵌合体小鼠，并且该嵌合体小鼠可以交配传代，从而获得MYH9基因替代杂合子及纯合子后代。
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