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公开(公告)号：CN113584024A
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN202110797328.0
申请日：2021-07-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/74
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及‘小金海棠’Mx‑miR175‑5p基因及其应用。‘小金海棠’Mx‑miR175‑5p，其前体序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次从‘小金海棠’鉴定到一个新的Mx‑miR175‑5p基因，RLM‑5’RACE验证其靶基因是BTB4蛋白；通过转基因技术，发现过表达Mx‑miR175‑5p能够提高苹果愈伤组织的铁III还原酶活性及铁吸收和转运相关基因的表达，说明其能够调节苹果对铁的吸收和转运能力，提升对缺铁胁迫的耐受性。因此，可利用其培育出具有高抗缺铁能力的转基因苹果。
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公开(公告)号：CN110100725A
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201910514652.X
申请日：2019-06-14
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种苹果树的液体授粉药剂，其主要成分包括黄原胶、硼酸、蔗糖、花粉、水，质量比为2:1:500:1:5000。本发明还公开了一种苹果树的液体授粉技术，包括如下步骤：配制液体授粉药剂，在苹果树的花开放数量至80％左右时，用喷雾器在花蕾上喷施本发明的授药剂，结合人工定果，成功为花朵授粉。本发明的有益效果为：采用了物理辅助方法进行授粉，对果实、人畜安全，对访花昆虫安全，对环境与生态安全。利用本发明的授粉液进行授粉，有效的提高了坐果率，减轻人工授粉的任务量，这样既能满足树体生长发育的需要，提高产量和品质，而且防止大小年现象，又能降低人工成本，提高经济效益。
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公开(公告)号：CN102121031A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010598338.3
申请日：2010-12-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程育种领域，公开了利用口蹄疫病毒2A序列构建植物三价融合基因表达载体的方法。该方法包含如下步骤：(1)序列分析引物合成，(2)MhTGA2、MhNPR1、MhChit1基因的扩增及其酶切，(3)合成含有口蹄疫病毒2A序列的两条序列，(4)植物双元表达载体的改造，(5)中间载体的构建，(6)植物三价双元表达载体的构建。通过本发明构建方法进行三价或者多价融合表达载体构建，大大提高了载体构建成功的概率，可以很大程度上缩小工作量，节约构建载体的时间，对今后通过多基因遗传转化改良品种具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104404156A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410742192.3
申请日：2014-12-08
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/156
Abstract: 本发明属于分子标记领域，提供一种枇杷自交亲和Si分子标记，自交亲和标记引物和自交亲和品种快速鉴定方法。该Si分子标记序列如SEQ ID NO.1所示，大小为830bp，标记引物AS-PCR序列：正向引物如SEQ ID NO.2；反向引物如SEQ ID NO.3所示。鉴定方法以Si作为分子标记，以标记引物AS-PCR扩增不同枇杷品种DNA，筛选，可扩增出830bp片段的标志着Si分子标记的存在，说明该枇杷品种为自交亲和品种。本方法能快速鉴定枇杷自交亲和品种，不需要配置授粉树或进行人工授粉，可大大节约成本；不易受外界因素影响，精确度大，打破了传统方法的局限性，对提高枇杷的产量和品质有很大意义。
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公开(公告)号：CN101717825A
公开(公告)日：2010-06-02
申请号：CN200910234386.1
申请日：2009-11-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种快速检测转基因烟草外源基因拷贝数的方法”，属于基因工程领域。人工合成一条95bp中间短截片段，克隆到含有目的基因的植物双元表达载体pCAMBIA-1301，转化至大肠杆菌DH5α菌株，再转化至农杆菌EHA105菌株，PCR检测后获得阳性菌株再转化至烟草‘K326’。将获得的阳性植株，进行PCR扩增，根据扩增获得的片段‘SSR-168’和‘SSR-95’电泳条带的亮度比较就可以确定与片段‘SSR-95’一同转入的外源基因的拷贝数。本发明只需采用一对SSR特异引物对转基因植物进行PCR检测，就可以快速检测转基因株系的拷贝数，简单易行，尤其是对插入单拷贝和双拷贝外源基因株系的检测。
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公开(公告)号：CN100523200C
公开(公告)日：2009-08-05
申请号：CN200610085395.5
申请日：2006-06-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 本发明“一种利用超声波直接转化苹果属植物获得转基因苗木的方法”属于生物工程育种领域。超声波直接转化法是将苹果属八棱海棠叶片切成小块在含有5%DMSO和20μg·ml-1质粒DNA的超声波缓冲液中用功率为80w的超声波处理后，放在再生培养基上培养进行抗性筛选，在超声波最佳处理条件下转化486个八棱海棠叶片，共得到237个抗性愈伤组织和9株抗性苗，转化率为1.85%，大大高于普通农杆菌介导法0.1～0.8%的转化效率。GUS染色、PCR及Southernblotting检测结果显示，有8个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。
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公开(公告)号：CN100493345C
公开(公告)日：2009-06-03
申请号：CN200710022803.7
申请日：2007-05-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方法”，属于生物工程技术领域。将取自田间健壮草莓花蕾，发育时期为单核靠边期(大小约为4-6mm)，在4℃冰箱冷处理72h(小时)。然后将花蕾分别用70%酒精、0.1%升汞(加吐温)消毒之后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水，将消毒处理好的花蕾剥取花药，接种到愈伤组织诱导培养基中，然后转到再生培养基中，再将诱导出的草莓健壮苗转接到继代培养基上，最后转到生根培养基进行生根处理。本方法将草莓花药培养分化率提高到37.5%，比现有技术提高了28.03个百分点，突破了传统分化率很低的困境。苗木生根后移栽成活率90%，从而促进草莓脱毒技术在生产上进一步应用和推广。
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公开(公告)号：CN101049090A
公开(公告)日：2007-10-10
申请号：CN200710022803.7
申请日：2007-05-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方法”，属于生物工程技术领域。将取自田间健壮草莓花蕾，发育时期为单核靠边期(大小约为4－6mm)，在4℃冰箱冷处理72h(小时)。然后将花蕾分别用70％酒精、0.1％升汞(加吐温)消毒之后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水，将消毒处理好的花蕾剥取花药，接种到愈伤组织诱导培养基中，然后转到再生培养基中，再将诱导出的草莓健壮苗转接到继代培养基上，最后转到生根培养基进行生根处理。本方法将草莓花药培养分化率提高到37.5％，比现有技术提高了28.03个百分点，突破了传统分化率很低的困境。苗木生根后移栽成活率90％，从而促进草莓脱毒技术在生产上进一步应用和推广。
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