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公开(公告)号：CN101717825A
公开(公告)日：2010-06-02
申请号：CN200910234386.1
申请日：2009-11-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种快速检测转基因烟草外源基因拷贝数的方法”，属于基因工程领域。人工合成一条95bp中间短截片段，克隆到含有目的基因的植物双元表达载体pCAMBIA-1301，转化至大肠杆菌DH5α菌株，再转化至农杆菌EHA105菌株，PCR检测后获得阳性菌株再转化至烟草‘K326’。将获得的阳性植株，进行PCR扩增，根据扩增获得的片段‘SSR-168’和‘SSR-95’电泳条带的亮度比较就可以确定与片段‘SSR-95’一同转入的外源基因的拷贝数。本发明只需采用一对SSR特异引物对转基因植物进行PCR检测，就可以快速检测转基因株系的拷贝数，简单易行，尤其是对插入单拷贝和双拷贝外源基因株系的检测。
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公开(公告)号：CN100523200C
公开(公告)日：2009-08-05
申请号：CN200610085395.5
申请日：2006-06-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 本发明“一种利用超声波直接转化苹果属植物获得转基因苗木的方法”属于生物工程育种领域。超声波直接转化法是将苹果属八棱海棠叶片切成小块在含有5%DMSO和20μg·ml-1质粒DNA的超声波缓冲液中用功率为80w的超声波处理后，放在再生培养基上培养进行抗性筛选，在超声波最佳处理条件下转化486个八棱海棠叶片，共得到237个抗性愈伤组织和9株抗性苗，转化率为1.85%，大大高于普通农杆菌介导法0.1～0.8%的转化效率。GUS染色、PCR及Southernblotting检测结果显示，有8个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。
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公开(公告)号：CN100493345C
公开(公告)日：2009-06-03
申请号：CN200710022803.7
申请日：2007-05-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方法”，属于生物工程技术领域。将取自田间健壮草莓花蕾，发育时期为单核靠边期(大小约为4-6mm)，在4℃冰箱冷处理72h(小时)。然后将花蕾分别用70%酒精、0.1%升汞(加吐温)消毒之后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水，将消毒处理好的花蕾剥取花药，接种到愈伤组织诱导培养基中，然后转到再生培养基中，再将诱导出的草莓健壮苗转接到继代培养基上，最后转到生根培养基进行生根处理。本方法将草莓花药培养分化率提高到37.5%，比现有技术提高了28.03个百分点，突破了传统分化率很低的困境。苗木生根后移栽成活率90%，从而促进草莓脱毒技术在生产上进一步应用和推广。
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公开(公告)号：CN101049090A
公开(公告)日：2007-10-10
申请号：CN200710022803.7
申请日：2007-05-22
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种利用草莓花药培养进行脱毒快繁的方法”，属于生物工程技术领域。将取自田间健壮草莓花蕾，发育时期为单核靠边期(大小约为4－6mm)，在4℃冰箱冷处理72h(小时)。然后将花蕾分别用70％酒精、0.1％升汞(加吐温)消毒之后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水，将消毒处理好的花蕾剥取花药，接种到愈伤组织诱导培养基中，然后转到再生培养基中，再将诱导出的草莓健壮苗转接到继代培养基上，最后转到生根培养基进行生根处理。本方法将草莓花药培养分化率提高到37.5％，比现有技术提高了28.03个百分点，突破了传统分化率很低的困境。苗木生根后移栽成活率90％，从而促进草莓脱毒技术在生产上进一步应用和推广。
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公开(公告)号：CN102121031A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010598338.3
申请日：2010-12-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程育种领域，公开了利用口蹄疫病毒2A序列构建植物三价融合基因表达载体的方法。该方法包含如下步骤：(1)序列分析引物合成，(2)MhTGA2、MhNPR1、MhChit1基因的扩增及其酶切，(3)合成含有口蹄疫病毒2A序列的两条序列，(4)植物双元表达载体的改造，(5)中间载体的构建，(6)植物三价双元表达载体的构建。通过本发明构建方法进行三价或者多价融合表达载体构建，大大提高了载体构建成功的概率，可以很大程度上缩小工作量，节约构建载体的时间，对今后通过多基因遗传转化改良品种具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101717825B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN200910234386.1
申请日：2009-11-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种快速检测转基因烟草外源基因拷贝数的方法”，属于基因工程领域。人工合成一条95bp中间短截片段，克隆到含有目的基因的植物双元表达载体pCAMBIA-1301，转化至大肠杆菌DH5α菌株，再转化至农杆菌EHA105菌株，PCR检测后获得阳性菌株再转化至烟草‘K326’。将获得的阳性植株，进行PCR扩增，根据扩增获得的片段‘SSR-168’和‘SSR-95’电泳条带的亮度比较就可以确定与片段‘SSR-95’一同转入的外源基因的拷贝数。本发明只需采用一对SSR特异引物对转基因植物进行PCR检测，就可以快速检测转基因株系的拷贝数，简单易行，尤其是对插入单拷贝和双拷贝外源基因株系的检测。
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公开(公告)号：CN101720647B
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN200910232403.8
申请日：2009-11-27
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01G17/00
Abstract: 本发明涉及增加青种枇杷果实含糖量的方法，属于作物栽培技术领域。选择生长旺盛的青种枇杷树，于果实成熟前50天左右进行药剂处理，处理前先进行常规的疏花、疏果。处理时用浓度为200mg·L-1的吲熟酯喷施，处理后常规管理。本发明所提供的吲熟酯200mg·L-1处理的青种枇杷果实总糖含量和可溶性固形物均有一定程度的提高，分别为对照的107.96％和115.68％；可滴定酸有一定的降低，为对照的77.78％。充分迎合了消费者的需求，有着广泛的市场前景，经济效益十分可观。
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公开(公告)号：CN101418350A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810155215.5
申请日：2008-10-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“超低温技术脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)的方法”，属于生物工程领域。在病毒脱除过程中，预培养蔗糖浓度为0.5mol/L，处理3d；装载处理为25℃，60min；玻璃化处理为0℃，120min；液氮处理60min后，进行40℃水浴2min，草莓茎尖的存活率为76％，草莓轻型黄边病毒的脱毒率达到95％。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒，液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0％。与茎尖培养脱毒法和热处理脱毒法等传统的脱毒法相比，超低温脱毒法不仅脱毒率很高，而且简单易行，便于操作，更不需要昂贵的仪器。从而为草莓无毒苗的示范推广及其产业化提供强有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN1944656A
公开(公告)日：2007-04-11
申请号：CN200610085395.5
申请日：2006-06-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 本发明“一种利用超声波直接转化苹果属植物获得转基因苗木的方法”属于生物工程育种领域。超声波直接转化法是将苹果属八棱海棠叶片切成小块在含有5％DMSO和20μl·ml－1质粒DNA的超声波缓冲液中用功率为80w的超声波处理后，放在再生培养基上培养进行抗性筛选，在超声波最佳处理条件下转化486个八棱海棠叶片，共得到237个抗性愈伤组织和9株抗性苗，转化率为1.85％，大大高于普通农杆菌介导法0.1～0.8％的转化效率。GUS染色、PCR及Southernblotting检测结果显示，有8个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。
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公开(公告)号：CN102115742A
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN201010585828.X
申请日：2010-12-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种植物中总核酸的同步提取方法。将生物材料粉碎后与CTAB裂解液混合，水浴45-60min，加入与CTAB裂解液等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂，混匀；离心，取上清，加入等体积的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂，混匀；离心，取上清，加入1/30体积的NaAc和1/10体积的无水乙醇，混匀，在冰上静置5min后，再加入等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂；离心，取上清，加入1/10体积的NaAc和两倍体积的无水乙醇，-20℃静置1h；离心，弃上清，用70％的乙醇洗涤沉淀1～5次，干燥得到包含基因组DNA和总RNA的总核酸。该发明同步提取烟草总核酸，对于今后开展基因克隆、表达分析等一系列分子生物学研究具有非常重要的意义。
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