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公开(公告)号：CN102776224B
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201210222766.5
申请日：2012-06-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了湖北海棠MhSGT1b基因的应用。受低温胁迫的诱导，MhSGT1b在植物中过量表达；在植物受到低温胁迫时，过量表达的MhSGT1b可诱导NtRbohD基因在植株中高水平表达、增强NtPIN1基因和NtSOD基因表达、短暂增强NtSPS的表达水平，从而共同抵御胁迫。MhSGT1b转基因烟草具有较强的抵御低温胁迫的能力，植株可在4℃低温条件下正常生长长达24h，同时也证明了MhSGT1b基因具有提高植物抗寒能力的功能。因此，MhSGT1b基因及含有所述的MhSGT1b基因的重组表达载体可在创制耐低温新种质和/或植物品种改良中应用。
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公开(公告)号：CN102115742A
公开(公告)日：2011-07-06
申请号：CN201010585828.X
申请日：2010-12-14
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种植物中总核酸的同步提取方法。将生物材料粉碎后与CTAB裂解液混合，水浴45-60min，加入与CTAB裂解液等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂，混匀；离心，取上清，加入等体积的由水饱和酚、氯仿及异戊醇组成的混合试剂，混匀；离心，取上清，加入1/30体积的NaAc和1/10体积的无水乙醇，混匀，在冰上静置5min后，再加入等体积的由氯仿和异戊醇组成的混合试剂；离心，取上清，加入1/10体积的NaAc和两倍体积的无水乙醇，-20℃静置1h；离心，弃上清，用70％的乙醇洗涤沉淀1～5次，干燥得到包含基因组DNA和总RNA的总核酸。该发明同步提取烟草总核酸，对于今后开展基因克隆、表达分析等一系列分子生物学研究具有非常重要的意义。
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公开(公告)号：CN102787123B
公开(公告)日：2014-06-11
申请号：CN201210222829.7
申请日：2012-06-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，公开了湖北海棠MhSGT1a基因及其应用。‘湖北海棠’MhSGT1a基因，核苷酸序列如SEQIDNO.1。所述的MhSGT1a基因在创制耐低温新种质和/或植物品种改良中的应用。本发明首次从‘湖北海棠’克隆得到了一个新的MhSGT1a基因，该基因与大麦、烟草、水稻、马铃薯、小麦、中间偃麦草、拟南芥的同源性分别为66.34%、71%、63.59%、69.38%、61.36%、62.93%、62.98%。MhSGT1a转基因烟草具有较强的抵御低温胁迫的能力，植株可在4℃低温条件下正常生长长达24h，同时也证明了MhSGT1a基因具有提高植物抗寒能力的功能。
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公开(公告)号：CN102121031A
公开(公告)日：2011-07-13
申请号：CN201010598338.3
申请日：2010-12-21
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程育种领域，公开了利用口蹄疫病毒2A序列构建植物三价融合基因表达载体的方法。该方法包含如下步骤：(1)序列分析引物合成，(2)MhTGA2、MhNPR1、MhChit1基因的扩增及其酶切，(3)合成含有口蹄疫病毒2A序列的两条序列，(4)植物双元表达载体的改造，(5)中间载体的构建，(6)植物三价双元表达载体的构建。通过本发明构建方法进行三价或者多价融合表达载体构建，大大提高了载体构建成功的概率，可以很大程度上缩小工作量，节约构建载体的时间，对今后通过多基因遗传转化改良品种具有重要意义。
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公开(公告)号：CN117223556A
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202311145027.5
申请日：2023-09-05
Abstract: 本发明公开了一种芥菜型油菜用于生物熏蒸的设施草莓连作土壤改良方法，包括以下步骤：清园、土地耕整、播种芥菜型油菜、播后管理、夏季高温生物熏蒸处理、草莓定植。其中播种的油菜选择硫苷含量高、生物量大、耐粗放式管理、春性强的芥菜型油菜品种；夏季高温生物熏蒸处理步骤中，利用夏季高温进行高温闷棚，使芥菜型油菜和菜籽饼充分腐熟发酵，利用芥菜型油菜含有的高浓度硫苷在闷棚期完成对土壤的生物熏蒸杀菌。芥菜型油菜与草莓进行轮作，可均衡的利用土壤中的养分，改善土壤微生物群落结构与组成；轮作还田后还可增加土壤肥力、有效防治土传病害，提高草莓的品质。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101717825B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN200910234386.1
申请日：2009-11-24
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“一种快速检测转基因烟草外源基因拷贝数的方法”，属于基因工程领域。人工合成一条95bp中间短截片段，克隆到含有目的基因的植物双元表达载体pCAMBIA-1301，转化至大肠杆菌DH5α菌株，再转化至农杆菌EHA105菌株，PCR检测后获得阳性菌株再转化至烟草‘K326’。将获得的阳性植株，进行PCR扩增，根据扩增获得的片段‘SSR-168’和‘SSR-95’电泳条带的亮度比较就可以确定与片段‘SSR-95’一同转入的外源基因的拷贝数。本发明只需采用一对SSR特异引物对转基因植物进行PCR检测，就可以快速检测转基因株系的拷贝数，简单易行，尤其是对插入单拷贝和双拷贝外源基因株系的检测。
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公开(公告)号：CN101418350A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810155215.5
申请日：2008-10-28
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及“超低温技术脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)的方法”，属于生物工程领域。在病毒脱除过程中，预培养蔗糖浓度为0.5mol/L，处理3d；装载处理为25℃，60min；玻璃化处理为0℃，120min；液氮处理60min后，进行40℃水浴2min，草莓茎尖的存活率为76％，草莓轻型黄边病毒的脱毒率达到95％。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒，液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0％。与茎尖培养脱毒法和热处理脱毒法等传统的脱毒法相比，超低温脱毒法不仅脱毒率很高，而且简单易行，便于操作，更不需要昂贵的仪器。从而为草莓无毒苗的示范推广及其产业化提供强有力的技术支持。
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公开(公告)号：CN1944656A
公开(公告)日：2007-04-11
申请号：CN200610085395.5
申请日：2006-06-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/87
Abstract: 本发明“一种利用超声波直接转化苹果属植物获得转基因苗木的方法”属于生物工程育种领域。超声波直接转化法是将苹果属八棱海棠叶片切成小块在含有5％DMSO和20μl·ml－1质粒DNA的超声波缓冲液中用功率为80w的超声波处理后，放在再生培养基上培养进行抗性筛选，在超声波最佳处理条件下转化486个八棱海棠叶片，共得到237个抗性愈伤组织和9株抗性苗，转化率为1.85％，大大高于普通农杆菌介导法0.1～0.8％的转化效率。GUS染色、PCR及Southernblotting检测结果显示，有8个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。
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公开(公告)号：CN107365765A
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201710616482.7
申请日：2017-07-26
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1003 , C12Q2527/119 , C12Q2527/137
Abstract: 本发明公开了一种草莓叶绿体基因组DNA的高效提取方法，先从草莓叶片的叶肉中分离出完整的无核污染的高纯度叶绿体；对所述的叶绿体进行裂解，得到叶绿体DNA粗品，对该叶绿体DNA粗品进行纯化，得到叶绿体DNA纯品。本发明所述的方法对部分耗材、试剂、离心力等进行改良，不需超高速离心机，也不需Mirocloth、匀浆机等昂贵耗材，首次利用高盐-低pH缓冲液结合Percoll密度梯度法成功分离出草莓大量完整的叶绿体，实现了草莓物种完整叶绿体的分离及高质量叶绿体DNA的提取，为草莓叶绿体基因组研究奠定基础，提取的叶绿体DNA具有高质量和高纯度等显著优点，满足基因组测序要求。
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公开(公告)号：CN103733986B
公开(公告)日：2016-04-13
申请号：CN201310719862.5
申请日：2014-02-17
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H1/08
Abstract: 本发明公开了一种诱导草莓染色体加倍的方法，属于植物生物技术领域。该方法五倍体草莓离体茎尖并用秋水仙素溶液将离体茎尖浸泡；然后将获得的所有五倍体材料进行批量加倍，并结合流式细胞仪技术和染色数目计数法将加倍后获得的材料进行了鉴定，获得了大量的十倍体材料。本发明操作简单，诱变时间较短，诱变率高，能够在短时间内获得大量的十倍体材料，是一种实用、可行、高效的诱导加倍技术。
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