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公开(公告)号：CN117757752A
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202311869243.4
申请日：2023-12-31
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达PRRSV次要结构蛋白的Marc‑145细胞系，该PRRSV次要结构蛋白包括GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明还公开了Marc‑145细胞系的制备方法，包括以下步骤：将猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4‑F112的次要结构蛋白DNA序列克隆到具有嘌呤霉素抗性的慢病毒载体上，应用慢病毒三质粒包装系统在293T细胞包装慢病毒，然后感染Marc‑145细胞，用嘌呤霉素选择性筛选，挑选单克隆细胞纯化，得到稳定表达次要结构蛋白的Marc‑145细胞株，所述次要结构蛋白选自下述任意一个：PRRSV次要结构蛋白GP2a、GP3、GP4、或ORF5a蛋白。本发明的Marc‑145细胞系，可用于PRRSV复制缺陷型疫苗的研发与筛选，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116904512A
公开(公告)日：2023-10-20
申请号：CN202310916062.6
申请日：2023-07-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种基于体外连接手段的拯救猪流行性腹泻病毒FJzz1株的反向遗传系统及其应用。通过对其全基因组进行分析，在其全基因组内特有的限制性内切酶酶切位点的基础上，我们将其分为A、B、C、D、E、F和G大小不等的七个片段。随后为提高后续连接效率，我们将这七个小片段整合为AB、CDE和FG三个大片段。利用T7体外转录试剂盒将全长cDNA体外转录为RNA转录本与N基因RNA转录本一起转染至Vero细胞拯救病毒。成功获得了可稳定遗传，且具有遗传标记的rFJzz1弱毒感染性克隆毒株，为后续研究FJzz1株PEDV致病机理和新型疫苗的研制提供了技术平台。
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公开(公告)号：CN112779228B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202110187738.3
申请日：2021-02-18
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N7/08 , A61K39/215 , A61P31/14
Abstract: 本发明公开了一种猪流行性腹泻病毒疫苗株及其制备方法，所述疫苗株为将FJzz1在Vero细胞连续传至200代获得。选取低代次FJzz1‑F20和高代次FJzz1‑F200毒株对仔猪进行了致病性评价，结果显示高代次FJzz1‑F200感染组仔猪临床表现明显轻于FJzz1‑F20感染组，且发病猪未有死亡。与FJzz1‑F20感染组相比，FJzz1‑F200感染组仔猪的粪便排毒量和肠组织中的病毒载量显著降低，且肠道组织无明显组织病理学改变。同时，检测发现FJzz1‑F200感染组在肠组织中可以诱导高水平的I型和III型干扰素产生。上述研究结果表明，本发明的FJzz1‑F200其致病性弱，具有作为PEDV候选弱毒疫苗毒株的潜力。
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公开(公告)号：CN112062831A
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN202010629062.4
申请日：2020-07-02
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/705 , C07K16/28 , C07K16/06 , A61K39/395 , A61P31/14 , G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明涉及一株CD163蛋白单克隆抗体MAb的制备方法、表位鉴定以及应用。通过将CD163对于PRRSV复制具有重要作用的功能结构域SRCR5‑6克隆到pColdI载体中，构建出原核表达载体中携带His标签的CD163 SRCR5‑6的蛋白，纯化SRCR5‑6蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞同和制备杂交瘤细胞获得抗猪CD163蛋白的单克隆抗体，且对抗体进行了表位鉴定。
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公开(公告)号：CN108753739A
公开(公告)日：2018-11-06
申请号：CN201810627238.5
申请日：2018-06-19
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C12N7/01 , A61K39/245 , A61P31/22 , A61K39/187 , A61P31/14
CPC classification number: C12N7/00 , A61K39/12 , A61K2039/552 , A61K2039/70 , A61P31/14 , A61P31/22 , C07K14/005 , C12N2710/16721 , C12N2710/16734 , C12N2770/24322 , C12N2770/24334
Abstract: 本发明公开了一种表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病毒弱毒株，其插入的外源序列包括：CMV启动子、猪瘟病毒E2蛋白的信号肽及编码E2蛋白第1‑342位氨基酸和SV40 polyA的核苷酸序列。本发明还公开了一种表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病毒弱毒株的制备方法和应用。本发明的重组伪狂犬病毒弱毒株，对伪狂犬病毒及猪瘟病毒均有较好的免疫保护效果，适于作为防治伪狂犬病及猪瘟的疫苗候选株。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119158007A
公开(公告)日：2024-12-20
申请号：CN202410799367.8
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供了表达白细胞介素‑15和白细胞介素‑18的重组PRRSV基因工程活载体疫苗及其应用。本发明提供的pPRRSV‑IL15‑Y和pPRRSV‑IL18‑Y这2个重组质粒转染MARC‑145细胞后，成功拯救出活病毒，与亲本病毒vHuN4‑F112具有相似的病毒学特性。将两株重组病毒进行猪体免疫实验，发现两种重组病毒对猪体均具有良好的安全性，免疫后可以有效诱导机体产生免疫应答，产生高水平的针对PRRSV N蛋白的抗体，而且可以诱导更高的细胞免疫水平，是一种良好的基因工程疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN116904512B
公开(公告)日：2024-11-15
申请号：CN202310916062.6
申请日：2023-07-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明提供一种基于体外连接手段的拯救猪流行性腹泻病毒FJzz1株的反向遗传系统及其应用。通过对其全基因组进行分析，在其全基因组内特有的限制性内切酶酶切位点的基础上，我们将其分为A、B、C、D、E、F和G大小不等的七个片段。随后为提高后续连接效率，我们将这七个小片段整合为AB、CDE和FG三个大片段。利用T7体外转录试剂盒将全长cDNA体外转录为RNA转录本与N基因RNA转录本一起转染至Vero细胞拯救病毒。成功获得了可稳定遗传，且具有遗传标记的rFJzz1弱毒感染性克隆毒株，为后续研究FJzz1株PEDV致病机理和新型疫苗的研制提供了技术平台。
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公开(公告)号：CN118846023A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410799352.1
申请日：2024-06-20
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: A61K39/12 , C12N7/01 , C12N15/86 , C12N15/66 , C12N15/24 , C12N15/40 , A61K39/187 , A61K38/20 , A61P31/14 , A61P37/04 , C12R1/93
Abstract: 本发明要求保护一种能够同时表达猪瘟病毒E2基因和IL18基因的重组活载体疫苗的构建方法和应用。利用嵌合质粒pPRRSV‑E2‑N‑IL18‑Y转染MARC‑145细胞后，成功拯救出活病毒，并且发现重组病毒rPRRSV‑E2‑N‑IL18‑Y与亲本病毒vHuN4‑F112和重组病毒rPRRSV‑E2具有相似的病毒学特性。将重组病毒rPRRSV‑E2‑N‑IL18‑Y进行猪体免疫实验，发现重组病毒对猪体均具有良好的安全性，免疫后可以有效诱导机体产生免疫应答，产生高水平的针对PRRSV N蛋白的抗体和CSFV E2蛋白的抗体，而且可以诱导更高的细胞免疫水平，是一种良好的基因工程疫苗候选株。
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公开(公告)号：CN113584063B
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202110882874.4
申请日：2021-08-02
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
Abstract: 本发明公开了一种基于转录调控序列重布的反向遗传操作方法及其应用，其中，所述方法为根据HuN4‑F112感染性克隆全长测序以及转录调控前导序列（Leader TRS），下游转录调控序列(body TRSs)一级核心6碱基序列的鉴定，将HuN4‑F112全基因组设计为分别包含Leader TRS,Body TRSs在内的六段基因组序列，分别设计用于Leader TRS,Body TRSs核心6碱基序列C5C6定点突变的引物，获得全基因组转录调控序列整体突变的基因组片段。该TRS circuit突变PRRS弱毒疫苗株能够有效抵抗自然环境中普遍发生的基因组间重组现象，对临床上PRRS的有效防控有重要意义。
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公开(公告)号：CN112661817B
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202011556967.X
申请日：2020-12-25
Applicant: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
IPC: C07K14/01 , C07K16/08 , C07K16/06 , G01N33/577 , G01N33/569
Abstract: 本发明涉及一株针对ASFV p54蛋白单克隆抗体的制备方法、表位鉴定以及应用。通过将分析p54蛋白的优势抗原表位，选取合适的区域克隆到pET‑30a载体中，构建出原核表达载体pET‑30a‑p54‑JD,将表达的p54蛋白纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗p54蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的p54蛋白抗原表位。
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