公开(公告)号：CN118166039A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410490390.9

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学 ,  榆林学院

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  朱海鲸 ,  雷安民 ,  万仕成 ,  李娜 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  刘晓宇 ,  任赵飞 ,  马东 ,  杜晓敏 ,  屈雷 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0275 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于转基因山羊制备技术领域，公开了一种慢病毒载体介导生产表达BLOC1S1转基因山羊方法，其特征在于：（1）构建含有BLOC1S1基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后超速离心，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液；（2）对山羊超数排卵后配种，于最后一次配种后12 h冲胚获得受精卵，利用显微操作系统将慢病毒浓缩液注射于受精卵透明带下，胚胎培养液继续培养24 h待发育至2细胞进行输卵管移植；（3）利用设计的跨载体引物PCR和qPCR技术检测转基因效率检测鉴定。采用本发明的方法，成功获得过表达BLOC1S1转基因山羊，转基因效率为63.6%。

公开(公告)号：CN111893119B

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202010814808.9

申请日：2020-08-13

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 田慧彬 ,  牛慧敏 ,  罗军 ,  姚玮玮 ,  李聪 ,  耿亚楠 ,  雷安民 ,  史怀平

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/89 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统与显微注射获得SCD1基因编辑山羊胚胎的方法。体外转录获得CRISPR/Cas9系统，采用两个sgRNA共同打靶同一目的基因的原则进行山羊受精卵显微注射；奶山羊进行同期发情与超数排卵处理后，在母羊最后一次接受交配后的8‑12小时，即发情开始后约46‑50小时进行冲胚，获得原核期受精卵，并置于含有10％胎牛血清的M199培养液中进行显微注射；本发明提高了SCD1基因编辑山羊胚胎的发育率及基因编辑效率，具有良好的推广应用前景和经济价值。

公开(公告)号：CN114908121A

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202210630057.4

申请日：2022-06-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  张炬庆 ,  雷安民 ,  岳威 ,  贺鑫

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一套可以将猪内源OCT4基因替换为GFP的载体系统。通过研究猪内源OCT4翻译起始位点的基因组序列特征，设计了可以将猪内源OCT4替换为GFP的新型载体系统。利用该载体系统，成功实现了原代猪成纤维细胞的基因替换，并通过体细胞核移植在猪的早期胚胎中实现了该报告系统的功能。进而，本发明提供了可以实时监测内源OCT4基因激活程度的新方法，避免了OCT4基因激活带来的基因表达网络的改变。本发明具有创新性强、报告精确、安全性好、操作简便等特点。为后续猪内源OCT4激活的机制研究提供了可靠的技术平台。

公开(公告)号：CN112852720A

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN202110166505.5

申请日：2021-02-04

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 胡建宏 ,  任发 ,  任毅杰 ,  李宇 ,  席华明 ,  温飞 ,  贤明 ,  赵梦洁 ,  朱大伟 ,  王立强 ,  雷安民 ,  李延华

IPC: C12N5/076

Abstract: 本发明公开了一种羊X、Y精子分选液、分选浮游体系及分选方法。所公开的方案是用特异蛋白TLR7/8激动剂R848“浮游体系”分选羊X、Y精子。本发明的奶山羊X、Y精子特异蛋白TLR7/8激活分选X、Y精子技术，分离方法简单且效果良好可靠，能够高效分离奶山羊X、Y精子；采用本发明分选后的X精子进行体外受精，雌性胚胎比例达到80.52％；采用本发明分选后的X精子进行人工授精，雌性胚胎的比例达到88.89％。

公开(公告)号：CN111956366A

公开(公告)日：2020-11-20

申请号：CN202010863475.9

申请日：2020-08-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 虞莲 ,  张新宇 ,  雷安民 ,  贺鑫

IPC: A61D7/00 ,  A61D17/00 ,  A61D19/02 ,  A01K67/02

Abstract: 一种诱导母猫发情和排卵的方法，属于动物人工繁殖技术领域。本发明针对母猫人工繁殖中发情和排卵难以同步的问题，提供了一种诱导母猫同期发情和超数排卵的方法。具体方案为对成年健康母猫连续饲喂剂量为0.01-20mg/只/天的烯丙孕素10-20天，并在停喂烯丙孕素2-3天后，给予母猫肌肉注射10-1000IU的孕马血清激素，72-96小时后肌肉注射10-1000IU的人绒毛膜促性腺激素，从而使得母猫可在预定时间内同期发情和超数排卵，本发明解决了一项家猫或猫科动物的人工繁育的关键技术难点。

公开(公告)号：CN102154198A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN201010590647.6

申请日：2010-12-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 雷安民 ,  赵贵民 ,  吴苏君 ,  刘文强 ,  井勇 ,  杨文琳 ,  高志敏

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种简易的卵母细胞体外成熟培养方法，包括以下步骤：A1.卵母细胞的收集；A2.密闭气袋的制备及卵母细胞的体外成熟培养；A3.卵母细胞的孤雌激活及体外培养：在体外成熟培养22～24h挑选排出第一极体的成熟卵母细胞，第28h化学方法激活，然后在卵裂培养液中培养3d，囊胚培养液中培养4d，7～9d后观察统计囊胚率。应用自制的密闭气袋系统，只需普通的生化培养箱或水浴锅就能完成卵母细胞和胚胎的体外培养，减少了对于贵重仪器的依赖，降低了研究门槛。应用该简易密闭气袋进行体外卵母细胞培养，能够发育到囊胚，并且体外成熟率、卵裂率和囊胚率与正常CO2培养箱中培养相比略有提高。

公开(公告)号：CN118222635A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410490456.4

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  万仕成 ,  李娜 ,  雷安民 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其步骤为：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞，48 h后离心后弃上清，PBS重悬分装。PMSG+HCG超排C57小鼠，体外受精2 h后将慢病毒浓缩液注射至受精卵透明带下，直至透明带明显膨胀变大，受精卵转移至KSOM胚胎培养液继续培养24 h后移植受体，成功获得过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠。本发明为BLOC1S1基因抗布鲁氏菌感染相关机制探索提供了研究模型。

公开(公告)号：CN111893119A

公开(公告)日：2020-11-06

申请号：CN202010814808.9

申请日：2020-08-13

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 田慧彬 ,  牛慧敏 ,  罗军 ,  姚玮玮 ,  李聪 ,  耿亚楠 ,  雷安民 ,  史怀平

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/89 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统与显微注射获得SCD1基因编辑山羊胚胎的方法。体外转录获得CRISPR/Cas9系统，采用两个sgRNA共同打靶同一目的基因的原则进行山羊受精卵显微注射；奶山羊进行同期发情与超数排卵处理后，在母羊最后一次接受交配后的8-12小时，即发情开始后约46-50小时进行冲胚，获得原核期受精卵，并置于含有10％胎牛血清的M199培养液中进行显微注射；本发明提高了SCD1基因编辑山羊胚胎的发育率及基因编辑效率，具有良好的推广应用前景和经济价值。