公开(公告)号：CN118166039A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410490390.9

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学 ,  榆林学院

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  朱海鲸 ,  雷安民 ,  万仕成 ,  李娜 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  刘晓宇 ,  任赵飞 ,  马东 ,  杜晓敏 ,  屈雷 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0275 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于转基因山羊制备技术领域，公开了一种慢病毒载体介导生产表达BLOC1S1转基因山羊方法，其特征在于：（1）构建含有BLOC1S1基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后超速离心，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液；（2）对山羊超数排卵后配种，于最后一次配种后12 h冲胚获得受精卵，利用显微操作系统将慢病毒浓缩液注射于受精卵透明带下，胚胎培养液继续培养24 h待发育至2细胞进行输卵管移植；（3）利用设计的跨载体引物PCR和qPCR技术检测转基因效率检测鉴定。采用本发明的方法，成功获得过表达BLOC1S1转基因山羊，转基因效率为63.6%。

公开(公告)号：CN116836935A

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202310573792.0

申请日：2023-05-19

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  陈文博 ,  万仕成 ,  张梦菲 ,  杨栋慧 ,  王聪亮

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种获得过表达山羊Nramp1基因细胞株的方法及该种细胞株在抗菌研究中的应用。通过慢病毒表达系统等手段，获得了过表达山羊Nramp1的山羊精原干细胞株(oeNramp1‑mGSCs)和小鼠巨噬细胞株(oeNramp1‑Raw264.7)。检测了过表达效率,经验证oeNramp1‑mGSCs相较于对照组，其Nramp1 mRNA上调120倍，其群体倍增时间显著缩短。除此之外，利用沙门氏菌LPS刺激oeNramp1‑Raw264.7，发现oeNramp1‑Raw264.7能够减少沙门氏菌LPS引起的细胞凋亡率。本发明具有创新性强、安全性好等特点，为后续抗菌研究提供了可靠的技术平台。

公开(公告)号：CN118222635A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410490456.4

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  万仕成 ,  李娜 ,  雷安民 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其步骤为：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞，48 h后离心后弃上清，PBS重悬分装。PMSG+HCG超排C57小鼠，体外受精2 h后将慢病毒浓缩液注射至受精卵透明带下，直至透明带明显膨胀变大，受精卵转移至KSOM胚胎培养液继续培养24 h后移植受体，成功获得过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠。本发明为BLOC1S1基因抗布鲁氏菌感染相关机制探索提供了研究模型。

公开(公告)号：CN116904443A

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202310954247.6

申请日：2023-08-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  万仕成 ,  陈文博 ,  张梦菲 ,  王聪亮

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种山羊BLOC1S1基因克隆方法、表达载体及应用：以山羊组织cDNA为模板，设计扩增引物，通过PCR扩增山羊BLOC1S1基因CDS区片段，再利用同源重组与CAG载体相连，与PAX2、VSVG质粒包装慢病毒，利用慢病毒载体构建山羊雄性生殖干细胞（mGSSC）的BLOC1S1稳定过表达细胞株，经验证其转录组水平相比对照组上调17倍。并且通过分析RNA‑seq数据发现，过表达BLOC1S1能提高细胞免疫相关基因IRF3、PYCARD、IL6、TLR2、CXCL8、LAMP2、CASPASE8、IL1b等的表达。本发明首次克隆了山羊BLOC1S1基因，构建过表达载体并转入细胞株后，发现BLOC1S1能有效提高细胞的免疫相关基因表达，因此BLOC1S1可作为家畜抗病育种的有效靶点。

公开(公告)号：CN117385059A

公开(公告)日：2024-01-12

申请号：CN202311627105.5

申请日：2023-11-30

Applicant: 榆林学院 ,  西北农林科技大学

Inventor： 朱海鲸 ,  王聪亮 ,  刘晓宇 ,  华进联 ,  李娜 ,  宋岩峰 ,  任赵飞 ,  李河林 ,  刘锦旺 ,  屈雷

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种预示绒山羊布病风险抗性的插入/缺失标记方法、检测试剂盒及其应用，属于生物技术与家畜育种技术领域。以待检测绒山羊全基因组为模板，设计引物以扩增绒山羊MBL2基因部分片段，再利用琼脂糖凝胶电泳和测序技术鉴定绒山羊MBL2基因第45046317_45046328位插入/缺失多态性位点的基因型，根据检测得到的不同基因型和等位基因在绒山羊病例和对照的分布，可认为MBL2基因第45046317_45046328位插入/缺失位点携带有插入型等位基因是绒山羊个体布病风险抗性基因，可起到预测绒山羊个体布病抗性的作用，因而该方法可应用在绒山羊分子标记辅助育种中，加快建立抗布病绒山羊优势遗传资源群体。

公开(公告)号：CN116287315A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202310336180.X

申请日：2023-03-31

Applicant: 西北农林科技大学 ,  榆林学院

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  朱海鲸 ,  屈雷 ,  鲁印国 ,  杜晓敏 ,  屈成 ,  白洋洋 ,  刘晓宇 ,  宋岩峰

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种绒山羊CTLA‑4基因插入/缺失标记的检测方法及其应用，以待检测绒山羊全基因组为模板，以设计的引物对P1和P2为扩增引物，通过PCR扩增绒山羊CTLA‑4基因部分片段，再利用琼脂糖凝胶电泳和测序技术鉴定绒山羊CTLA‑4基因NC_030809.1:rs655778058,g.43841952_43841968位和NC_030809.1:rs656541224,g.43843568_43843579位插入/缺失多态性位点的基因型。相关分析结果发现，绒山羊CTLA‑4基因两个InDel位点不同基因型与陕北白绒山羊布病抗性存在显著相关关系，可以作为陕北白绒山羊抗布病育种的有效DNA标记。本发明根据检测到的绒山羊CTLA‑4基因InDel位点插入/缺失的基因型，可作为绒山羊布病防治与抗布病遗传育种的有效DNA标记。

公开(公告)号：CN118853895A

公开(公告)日：2024-10-29

申请号：CN202410753830.5

申请日：2024-06-12

Applicant: 榆林学院 ,  西北农林科技大学 ,  陕西神澳农业生物技术开发股份有限公司

Inventor： 朱海鲸 ,  刘晓宇 ,  杜晓敏 ,  华进联 ,  王聪亮 ,  马东 ,  李艳艳 ,  宋岩峰 ,  袁筱乐 ,  巨敏莹 ,  宋晓越 ,  李河林 ,  李陇平 ,  翟军军 ,  董书伟 ,  陈生会

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6858 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种绒山羊SP110基因插入/缺失标记的检测方法及其应用，涉及家畜育种技术领域，包括以下操作：以待检测绒山羊全基因组为模板，此绒山羊SP110基因插入/缺失标记的检测方法及其应用，本发明根据绒山羊SP110基因5’上游调控区序列设计引物，以绒山羊基因组DNA为模板，通过PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳和直接测序技术，能够精确、快速和低成本的检测绒山羊SP110基因NC_030809.1:rs639658778,g.17496443_17496444位的插入/缺失多态性。本发明利用PCR扩增技术检测绒山羊SP110基因插入/缺失多态性，并进行基因型和等位基因频率分析，首次发现SP110基因与白绒山羊布鲁氏菌病抗性的显著相关，可作为白绒山羊抗布鲁氏菌病遗传育种的有效DNA标记。