公开(公告)号：CN120025984A

公开(公告)日：2025-05-23

申请号：CN202510183837.2

申请日：2025-02-19

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  吴文萍 ,  陈文博 ,  李娜 ,  万仕成 ,  雒璇

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种Tyrobp基因敲除巨噬细胞株的构建方法及其在布鲁氏菌LPS诱导炎症反应中的应用。本发明采用CRISPR/Cas9基因编辑技术结合慢病毒表达系统，成功构建了Tyrobp基因敲除的RAW264.7巨噬细胞株（KO Tyrobp‑RAW264.7），并通过基因组测序和Western blot方法验证了基因敲除效果。试验表明，该基因敲除细胞株在维持正常增殖能力的同时，表现出显著的吞噬功能减弱。经布鲁氏菌LPS处理后，KO Tyrobp‑RAW264.7细胞株显示炎性因子及NFκB表达水平显著升高，表明Tyrobp基因在布鲁氏菌LPS诱导的炎症反应中具有重要调控作用。本发明为深入研究布鲁氏菌抗菌免疫机制提供了新的实验模型和技术平台，在生物医学领域具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN118166039A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410490390.9

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学 ,  榆林学院

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  朱海鲸 ,  雷安民 ,  万仕成 ,  李娜 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  刘晓宇 ,  任赵飞 ,  马东 ,  杜晓敏 ,  屈雷 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0275 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于转基因山羊制备技术领域，公开了一种慢病毒载体介导生产表达BLOC1S1转基因山羊方法，其特征在于：（1）构建含有BLOC1S1基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后超速离心，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液；（2）对山羊超数排卵后配种，于最后一次配种后12 h冲胚获得受精卵，利用显微操作系统将慢病毒浓缩液注射于受精卵透明带下，胚胎培养液继续培养24 h待发育至2细胞进行输卵管移植；（3）利用设计的跨载体引物PCR和qPCR技术检测转基因效率检测鉴定。采用本发明的方法，成功获得过表达BLOC1S1转基因山羊，转基因效率为63.6%。

公开(公告)号：CN116836935A

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202310573792.0

申请日：2023-05-19

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  陈文博 ,  万仕成 ,  张梦菲 ,  杨栋慧 ,  王聪亮

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种获得过表达山羊Nramp1基因细胞株的方法及该种细胞株在抗菌研究中的应用。通过慢病毒表达系统等手段，获得了过表达山羊Nramp1的山羊精原干细胞株(oeNramp1‑mGSCs)和小鼠巨噬细胞株(oeNramp1‑Raw264.7)。检测了过表达效率,经验证oeNramp1‑mGSCs相较于对照组，其Nramp1 mRNA上调120倍，其群体倍增时间显著缩短。除此之外，利用沙门氏菌LPS刺激oeNramp1‑Raw264.7，发现oeNramp1‑Raw264.7能够减少沙门氏菌LPS引起的细胞凋亡率。本发明具有创新性强、安全性好等特点，为后续抗菌研究提供了可靠的技术平台。

公开(公告)号：CN118222635A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410490456.4

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  万仕成 ,  李娜 ,  雷安民 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其步骤为：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞，48 h后离心后弃上清，PBS重悬分装。PMSG+HCG超排C57小鼠，体外受精2 h后将慢病毒浓缩液注射至受精卵透明带下，直至透明带明显膨胀变大，受精卵转移至KSOM胚胎培养液继续培养24 h后移植受体，成功获得过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠。本发明为BLOC1S1基因抗布鲁氏菌感染相关机制探索提供了研究模型。

公开(公告)号：CN116904443A

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202310954247.6

申请日：2023-08-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  万仕成 ,  陈文博 ,  张梦菲 ,  王聪亮

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种山羊BLOC1S1基因克隆方法、表达载体及应用：以山羊组织cDNA为模板，设计扩增引物，通过PCR扩增山羊BLOC1S1基因CDS区片段，再利用同源重组与CAG载体相连，与PAX2、VSVG质粒包装慢病毒，利用慢病毒载体构建山羊雄性生殖干细胞（mGSSC）的BLOC1S1稳定过表达细胞株，经验证其转录组水平相比对照组上调17倍。并且通过分析RNA‑seq数据发现，过表达BLOC1S1能提高细胞免疫相关基因IRF3、PYCARD、IL6、TLR2、CXCL8、LAMP2、CASPASE8、IL1b等的表达。本发明首次克隆了山羊BLOC1S1基因，构建过表达载体并转入细胞株后，发现BLOC1S1能有效提高细胞的免疫相关基因表达，因此BLOC1S1可作为家畜抗病育种的有效靶点。