公开(公告)号：CN118222635A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410490456.4

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  万仕成 ,  李娜 ,  雷安民 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠的构建方法，其步骤为：将含有BLOC1S1基因的pCDH慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞，48 h后离心后弃上清，PBS重悬分装。PMSG+HCG超排C57小鼠，体外受精2 h后将慢病毒浓缩液注射至受精卵透明带下，直至透明带明显膨胀变大，受精卵转移至KSOM胚胎培养液继续培养24 h后移植受体，成功获得过表达羊源BLOC1S1转基因小鼠。本发明为BLOC1S1基因抗布鲁氏菌感染相关机制探索提供了研究模型。

公开(公告)号：CN116904443A

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202310954247.6

申请日：2023-08-01

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  万仕成 ,  陈文博 ,  张梦菲 ,  王聪亮

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/867 ,  C12Q1/6888

Abstract: 本发明公开了一种山羊BLOC1S1基因克隆方法、表达载体及应用：以山羊组织cDNA为模板，设计扩增引物，通过PCR扩增山羊BLOC1S1基因CDS区片段，再利用同源重组与CAG载体相连，与PAX2、VSVG质粒包装慢病毒，利用慢病毒载体构建山羊雄性生殖干细胞（mGSSC）的BLOC1S1稳定过表达细胞株，经验证其转录组水平相比对照组上调17倍。并且通过分析RNA‑seq数据发现，过表达BLOC1S1能提高细胞免疫相关基因IRF3、PYCARD、IL6、TLR2、CXCL8、LAMP2、CASPASE8、IL1b等的表达。本发明首次克隆了山羊BLOC1S1基因，构建过表达载体并转入细胞株后，发现BLOC1S1能有效提高细胞的免疫相关基因表达，因此BLOC1S1可作为家畜抗病育种的有效靶点。

公开(公告)号：CN117138063A

公开(公告)日：2023-12-01

申请号：CN202310529761.5

申请日：2023-05-11

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  李娜 ,  李云香 ,  张梦菲 ,  吴文萍

IPC: A61K48/00 ,  A01K67/02 ,  C12N15/867 ,  C12N7/01 ,  C12N15/12 ,  A61P15/08

Abstract: 本发明公开了一种治疗由LPS引起的雄性生殖障碍性疾病的治疗方法：利用输出管注射的方法建立睾丸中过表达Eif2s3y基因的小鼠模型。手术三周后，腹腔注射LPS形成睾丸炎模型。注射后48小时后采集小鼠睾丸样品进行检测。睾丸组织切片HE染色结果表明，与对照组相比，过表达Eif2s3y的睾丸曲细精管的结构更加规则，脱落至管腔的未成熟生殖细胞数量减少。通过转录组测序分析，表明过表达Eif2s3y组的上调差异基因集中在与精子发生相关的生物学过程中。通过检测发现，过表达Eif2s3y组中精子发生相关因子的表达量显著高于对照组。这些结果说明过表达Eif2s3y可以治疗由LPS引起的雄性生殖障碍性疾病。

公开(公告)号：CN118166039A

公开(公告)日：2024-06-11

申请号：CN202410490390.9

申请日：2024-04-23

Applicant: 西北农林科技大学 ,  榆林学院

Inventor： 华进联 ,  王聪亮 ,  朱海鲸 ,  雷安民 ,  万仕成 ,  李娜 ,  陈文博 ,  李剑南 ,  刘晓宇 ,  任赵飞 ,  马东 ,  杜晓敏 ,  屈雷 ,  张梦菲

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  A01K67/0275 ,  C12Q1/6888 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于转基因山羊制备技术领域，公开了一种慢病毒载体介导生产表达BLOC1S1转基因山羊方法，其特征在于：（1）构建含有BLOC1S1基因的慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后超速离心，PBS重悬后获得慢病毒浓缩液；（2）对山羊超数排卵后配种，于最后一次配种后12 h冲胚获得受精卵，利用显微操作系统将慢病毒浓缩液注射于受精卵透明带下，胚胎培养液继续培养24 h待发育至2细胞进行输卵管移植；（3）利用设计的跨载体引物PCR和qPCR技术检测转基因效率检测鉴定。采用本发明的方法，成功获得过表达BLOC1S1转基因山羊，转基因效率为63.6%。

公开(公告)号：CN116836935A

公开(公告)日：2023-10-03

申请号：CN202310573792.0

申请日：2023-05-19

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 华进联 ,  陈文博 ,  万仕成 ,  张梦菲 ,  杨栋慧 ,  王聪亮

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12 ,  C12Q1/6881 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种获得过表达山羊Nramp1基因细胞株的方法及该种细胞株在抗菌研究中的应用。通过慢病毒表达系统等手段，获得了过表达山羊Nramp1的山羊精原干细胞株(oeNramp1‑mGSCs)和小鼠巨噬细胞株(oeNramp1‑Raw264.7)。检测了过表达效率,经验证oeNramp1‑mGSCs相较于对照组，其Nramp1 mRNA上调120倍，其群体倍增时间显著缩短。除此之外，利用沙门氏菌LPS刺激oeNramp1‑Raw264.7，发现oeNramp1‑Raw264.7能够减少沙门氏菌LPS引起的细胞凋亡率。本发明具有创新性强、安全性好等特点，为后续抗菌研究提供了可靠的技术平台。