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公开(公告)号：CN110408676A
公开(公告)日：2019-11-05
申请号：CN201910656506.0
申请日：2019-07-19
Applicant: 海南大学
Abstract: 目前，纳米孔技术已经成为核酸测序和分析的热点方法。然而，以高灵敏度和特异性在宽浓度范围内检测并量化超低水平核酸仍然是一个挑战。本工作拟研发了一种超灵敏的基于胰蛋白酶激活气溶素原成孔的纳米孔策略（tNASA——trypsin-activated nanopore amplified sandwich assay），通过胰蛋白酶激活气溶素原和使用微型电流放大器eONEHS的信号检测来进行待测样品的信号放大。本工作创新性体现在：利用胰蛋白酶激活气溶素原组装纳米孔作为信号发生器做到了对信号的二次放大，能够进行aM核酸和单细胞水平上的检测，不仅能够满足微生物检测领域中高选择性、高灵敏度和低成本的要求，同时也为病毒的诊断提供了新的见解。
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公开(公告)号：CN107586825A
公开(公告)日：2018-01-16
申请号：CN201710843414.4
申请日：2017-09-18
Applicant: 海南大学
Abstract: 海洋病害微生物是影响国民经济建设的重要因素之一，开展病害微生物检测和控制研究对国民经济建设有重大意义。本工作拟研发了一种基于季铵盐化磁性纳米材料与脲酶复合传感器平台快速直接分析环境生物样品中微生物。项目主要内容为：重点设计季铵盐化磁性纳米材料-脲酶复合传感器与微生物响应材料识别机制和反应动力学，考察这些识别响应的功能模块在微生物快速检测和微生物即时表达分析中作用规律。本工作创新性体现在：基础研究水平上揭示铵盐化磁性纳米材料-脲酶复合传感器与微生物作用关系，总结一站式微生物分析仪与不同微生物作用的规律，特别为解决涉及微生物检测方法中“便携式”和“全自动”问题提供参考和借鉴。
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公开(公告)号：CN118813763A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202311447053.3
申请日：2023-11-01
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12N15/11 , C12R1/46
Abstract: 本发明涉及建立一种病原菌检测的方法，将竞争性介导等温扩增技术(competitive annealing mediated isothermal amplification，CAMP)与Cas14a检测系统结合，实现病原菌目的基因片段的等温快速扩增，然后利用Cas14a酶的特异性靶向激活机制获得信号放大，最后通过酶标仪或可视化观察读取检测结果。本发明的意义在于利用竞争性介导等温扩增技术的高灵敏性与操作便捷快速，Cas14a酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，而且荧光信号的快速、直观读取使其可用于现场检测，满足及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。
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公开(公告)号：CN112159837A
公开(公告)日：2021-01-01
申请号：CN202011129831.0
申请日：2020-10-21
Applicant: 海南大学
Abstract: 病原微生物的及时检测对疾病的管控和治疗非常关键，本工作拟研发了一种基于金结合多肽标签功能化肉毒素的微生物诊断传感器。传感器通过将不等长PCR的扩增产物与肉毒素功能化的纳米金核酸探针进行组装构成肉毒素功能化的复合物，联合SNAPtide探针将检测信号转变成荧光信号或者可见光信号来实现对病原微生物的超灵敏检测。本工作的创新性体现在：传感器通过普通PCR扩增结合肉毒素功能化的纳米金核酸探针实现，设计简单、方便，并且可以直接通过荧光和可见光双重信号对病原微生物进行检测，为基于纳米金的比色检测传感器的设计提供一种新的策略。
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公开(公告)号：CN119082370A
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202411380517.8
申请日：2024-09-30
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12N15/113 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种基于RT‑LAMP‑Cas14a无PAM限制的石斑鱼神经坏死病毒检测方法，所述方法是一种基于一组特异性的神经坏死病毒RNA RT‑LAMP扩增引物，在FIP引物的3’端引入PAM序列，经过60℃恒温扩增后其产物被CRISPR‑Cas14a特异性识别，随后激活Cas14a酶并触发其非特异性反式切割能力的一种方法。具体涉及水产病毒快速诊断领域。由于神经坏死病毒RNA核酸序列不含Cas14a识别的PAM序列，本发明对RT‑LAMP扩增引物进行改造，实现RNA核酸一步法扩增与CRISPR‑Cas14a相结合，使其突破了Cas14a检测技术的限制，为神经坏死病毒提供一种高特异性、高灵敏度的检测技术。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN118813764A
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202410198129.1
申请日：2024-02-22
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/6844 , C12Q1/689 , C12N15/11 , C12R1/46
Abstract: 本发明涉及建立一种核酸检测的方法，将传统环介导等温扩增（LAMP）进行引物改造，完成一次信号放大，之后通过链置换反应产生单链DNA靶标完成二次信号放大，实现无前间隔序列邻近基序（protospacer adjacent motif）位点即无PAM位点限制的广适性CRISPR‑Cas12f核酸检测。本发明的意义在于利用环介导等温扩增技术的高灵敏性、操作便捷快速以及引物可按需改造的特点，结合链置换反应高效率，使得靶标信号二次级联放大，通过Cas12f酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，建议的恒温反应流程满足了及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。
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公开(公告)号：CN108562742B
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201810313597.3
申请日：2018-04-10
Applicant: 海南大学
IPC: G01N33/569
Abstract: 海洋病害微生物是影响国民经济建设的重要因素之一，开展病害微生物检测和控制研究对国民经济建设有重大意义。本工作拟研发了一种基于金属结合多肽标签的溶血素组装纳米孔的纳米传感器超灵敏诊断病原微生物。项目主要内容为：重点设计金属结合多肽标签的溶血素与检测探针分子在纳米金表面识别机制和反应动力学，考察pA电流计在微生物快速检测和微生物即时表达分析中作用规律。本工作创新性体现在：利用金属结合多肽标签的溶血素组装纳米孔作为信号发生器在分子水平上检测微生物，特别为解决涉及微生物检测方法中“便携式”和“全自动”问题提供参考和借鉴。
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公开(公告)号：CN119662791A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202510012940.0
申请日：2025-01-06
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于aPCR‑Cas12快速鉴别金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，属于基因检测技术领域。本发明以nuc为目标基因，利用aPCR扩增出单链ssDNA，根据序列合成互补链PC‑ssDNA，并修饰PClinker基团。二者杂交后紫外处理，切断修饰位点形成立足点双链，联合CRISPR‑Cas12系统提高SNP检测能力，通过读取荧光信号，显著性分析P值实现金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的区分检测。该体系无需PAM位点，能够检测到低至9CUF/mL的目标基因，对混合基因中SNP突变率检测的灵敏度达到0.01％。本发明提供的方法对病原菌监控与防治方面都有重要意义。
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公开(公告)号：CN118421765A
公开(公告)日：2024-08-02
申请号：CN202410632776.9
申请日：2024-05-21
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/6858
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12系统光激活检测SNP的方法。该方法中，根据待检测(miRNA作为RNA)靶核酸单链信息，设计、合成其PClinker基团修饰的互补ssDNA链，二者杂交后紫外光照射形成立足点，联合CRISPR‑Cas12系统将检测信号转变成荧光信号来实现核酸检测，并且区分单碱基突变。本发明所述方法材料设计简单、成本低、操作方便，并且可以在40min内直接通过荧光信号检测SNP，区分野生型与突变型，对于癌症的个性化生物标记物诊断和基因治疗方面都有重要意义。
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公开(公告)号：CN117467800A
公开(公告)日：2024-01-30
申请号：CN202210869600.6
申请日：2022-07-23
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12Q1/6806 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 一种基于CRISPR/Cas14a系统的核酸可视化检测方法与应用本发明涉及一种CRISPR/Cas14a基因编辑系统和纳米金信号探针进行核酸可视化检测的方法及其在非洲猪瘟病毒（ASFV）的检测应用，靶标核酸加入含修饰ssDNA的纳米金及CRISPR/Cas14可视化检测体系中，不仅可通过酶标仪检测荧光信号的变化判断结果，也能通过肉眼观察纳米金团聚状态进行结果判读。核酸快提剂和羟基二氧化硅提取ASFV全血核酸，经过环介导等温扩增进行快速放大后加入可视化检测体系，成功实现ASFV的可视化检测。该方法核酸提取扩增无需大型仪器，可视化结果观察，可适用于微生物等的快速现场检测。
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