公开(公告)号：CN118813763A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202311447053.3

申请日：2023-11-01

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  孟天 ,  任义华 ,  鲁琳 ,  骆彦驰 ,  黄娇媚 ,  万逸

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明涉及建立一种病原菌检测的方法，将竞争性介导等温扩增技术(competitive annealing mediated isothermal amplification，CAMP)与Cas14a检测系统结合，实现病原菌目的基因片段的等温快速扩增，然后利用Cas14a酶的特异性靶向激活机制获得信号放大，最后通过酶标仪或可视化观察读取检测结果。本发明的意义在于利用竞争性介导等温扩增技术的高灵敏性与操作便捷快速，Cas14a酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，而且荧光信号的快速、直观读取使其可用于现场检测，满足及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。

公开(公告)号：CN117467800A

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202210869600.6

申请日：2022-07-23

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  王庆伟 ,  孟天 ,  陈会友 ,  张幸悦 ,  黄心怡

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6806 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 一种基于CRISPR/Cas14a系统的核酸可视化检测方法与应用本发明涉及一种CRISPR/Cas14a基因编辑系统和纳米金信号探针进行核酸可视化检测的方法及其在非洲猪瘟病毒（ASFV）的检测应用，靶标核酸加入含修饰ssDNA的纳米金及CRISPR/Cas14可视化检测体系中，不仅可通过酶标仪检测荧光信号的变化判断结果，也能通过肉眼观察纳米金团聚状态进行结果判读。核酸快提剂和羟基二氧化硅提取ASFV全血核酸，经过环介导等温扩增进行快速放大后加入可视化检测体系，成功实现ASFV的可视化检测。该方法核酸提取扩增无需大型仪器，可视化结果观察，可适用于微生物等的快速现场检测。

公开(公告)号：CN118813764A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202410198129.1

申请日：2024-02-22

Applicant: 海南大学

Inventor： 孟天 ,  宋凤阁 ,  鲁琳 ,  骆彦池 ,  任义华 ,  万逸

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明涉及建立一种核酸检测的方法，将传统环介导等温扩增（LAMP）进行引物改造，完成一次信号放大，之后通过链置换反应产生单链DNA靶标完成二次信号放大，实现无前间隔序列邻近基序（protospacer adjacent motif）位点即无PAM位点限制的广适性CRISPR‑Cas12f核酸检测。本发明的意义在于利用环介导等温扩增技术的高灵敏性、操作便捷快速以及引物可按需改造的特点，结合链置换反应高效率，使得靶标信号二次级联放大，通过Cas12f酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，建议的恒温反应流程满足了及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。