公开(公告)号：CN119082370A

公开(公告)日：2024-12-06

申请号：CN202411380517.8

申请日：2024-09-30

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  阳秀芬 ,  邵宝凯 ,  鲁琳 ,  万逸

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种基于RT‑LAMP‑Cas14a无PAM限制的石斑鱼神经坏死病毒检测方法，所述方法是一种基于一组特异性的神经坏死病毒RNA RT‑LAMP扩增引物，在FIP引物的3’端引入PAM序列，经过60℃恒温扩增后其产物被CRISPR‑Cas14a特异性识别，随后激活Cas14a酶并触发其非特异性反式切割能力的一种方法。具体涉及水产病毒快速诊断领域。由于神经坏死病毒RNA核酸序列不含Cas14a识别的PAM序列，本发明对RT‑LAMP扩增引物进行改造，实现RNA核酸一步法扩增与CRISPR‑Cas14a相结合，使其突破了Cas14a检测技术的限制，为神经坏死病毒提供一种高特异性、高灵敏度的检测技术。

公开(公告)号：CN119246475A

公开(公告)日：2025-01-03

申请号：CN202411378220.8

申请日：2024-09-30

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  任义华 ,  林志赟 ,  阳秀芬 ,  万逸

IPC: G01N21/64

Abstract: 本发明提供了一种沙门氏菌检测的侧向层析试纸条及其检测方法，属于食品安全诊断领域。本发明所述荧光纳米金刚石为含氮空位色心的纳米金刚石，在540nm激发光下，可激发670nm附近红色荧光，同时，荧光纳米金刚石通过微波调控可以改变内部的量子自旋，滤除背景荧光，从而提高检测限；本发明所述试纸条可以在较低浓度的实际样本中，通过Cas12特异性靶向激活机制获得第一次信号放大，接着通过荧光纳米金刚石的荧光信号进行第二次放大，实现对沙门氏菌的快速高灵敏检测。本发明的意义在于通过更换标记材料改变信号输出方式，提升试纸条灵敏度，Cas12酶具有精确的核酸靶向和切割功能，能对非靶标核酸进行切割，将检测信号进一步放大，提高检测特异性、灵敏度，而且荧光信号的快速、直观读取使其可用于现场检测，满足及时快速的诊断需求，在食品安全诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。

公开(公告)号：CN118813870A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202311455726.X

申请日：2023-11-03

Applicant: 海南大学

Inventor： 阳秀芬 ,  宋凤阁 ,  鲁琳 ,  王康乔 ,  胡沛东 ,  万逸

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了一种利用RTX逆转录酶和Bst DNA聚合酶的RT‑LAMP可视化检测石斑鱼神经坏死病毒的体系，包括一下步骤：1)提取石斑鱼神经坏死病毒RNA；2)设计并合成特异性引物；3)对钙黄绿素和MnCl2浓度比进行优化；4)对反应体系特异性和灵敏度进行分析。本发明利用RTX逆转录酶和Bst DNA聚合酶直接进行RNA病毒检测，并利用钙黄绿素显示指示剂使检测结果可视化，可肉眼观察检测结果，具有操作简单、快速、准确、高灵敏度等特点，对于资源匮乏地区疫情监控具有很大潜力。

公开(公告)号：CN118813601A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202311465918.9

申请日：2023-11-07

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  阳秀芬 ,  鲁琳 ,  胡沛东 ,  王康乔 ,  万逸

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明提供一种可与磁珠结合的病毒RNA快速提取的裂解液，该裂解液成分简单，原料廉价易得，可快速高效裂解病毒组织，并释放出RNA。该裂解液与二氧化硅磁珠联用，可快速完成病毒RNA抽提；避免使用苯酚、氯仿的等对人体有危害的有机溶剂；操作简单、无需离心设备。其提取质量与商业试剂盒相当，可直接用于后续RNA扩增和检测，适用于实验室或现场病毒快速检测。

公开(公告)号：CN117431336A

公开(公告)日：2024-01-23

申请号：CN202210870980.5

申请日：2022-07-23

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  阳秀芬 ,  王庆伟 ,  王中飞雪 ,  刘晨辉 ,  王诗悦

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 一种检测海水鱼神经坏死病毒的单酶RT‑qPCR体系本发明提供一种利用RTX逆转录酶的RT‑qPCR检测石斑鱼神经坏死病毒的方法，包括以下步骤：1）取感染神经坏死病毒的石斑鱼的新鲜脑组织并提取RNA；2）设计并合成引物；3）制备反应体系；4）以待测的样本RNA为模板进行RT‑qPCR反应；5）获得荧光信号强度并进行结果分析及反应体系特异性试验。本发明利用单酶直接检测RNA病毒，集所有试剂于一管中进行一步反应，不需要分步实验，与常规RT‑qPCR实验相比，具有操作简单、低成本、快速等特点，有潜力成为临床检测和疫情监控的有力工具。

公开(公告)号：CN116970597A

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202210434992.3

申请日：2022-04-24

Applicant: 海南大学

Inventor： 王庆伟 ,  阳秀芬 ,  宋凤阁 ,  万逸 ,  周永灿 ,  孙云 ,  蔡慧莹 ,  陶钰玲 ,  林心怡 ,  申逸

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q1/6844

Abstract: 一种可与磁珠结合进行病毒核酸提取的裂解液本发明涉及一种可与磁珠结合进行病毒核酸提取的裂解液，病毒在裂解液的作用下释放核酸并吸附在磁珠上，吸附在磁珠上的核酸及洗脱下的核酸溶液均可直接进行下游的扩增、检测、分子杂交等实验，此外该病毒裂解液可直接使用全血进行病毒核酸裂解，可适用于畜牧类传染性疾病的快速现场检测。