公开(公告)号：CN118813764A

公开(公告)日：2024-10-22

申请号：CN202410198129.1

申请日：2024-02-22

Applicant: 海南大学

Inventor： 孟天 ,  宋凤阁 ,  鲁琳 ,  骆彦池 ,  任义华 ,  万逸

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12R1/46

Abstract: 本发明涉及建立一种核酸检测的方法，将传统环介导等温扩增（LAMP）进行引物改造，完成一次信号放大，之后通过链置换反应产生单链DNA靶标完成二次信号放大，实现无前间隔序列邻近基序（protospacer adjacent motif）位点即无PAM位点限制的广适性CRISPR‑Cas12f核酸检测。本发明的意义在于利用环介导等温扩增技术的高灵敏性、操作便捷快速以及引物可按需改造的特点，结合链置换反应高效率，使得靶标信号二次级联放大，通过Cas12f酶识别单链核酸无PAM位点限制特点以及高特异性，提高了本方法的广适性、特异性、灵敏性，建议的恒温反应流程满足了及时快速的诊断需求，在核酸诊断领域具有重要的应用潜力与经济价值。

公开(公告)号：CN119662791A

公开(公告)日：2025-03-21

申请号：CN202510012940.0

申请日：2025-01-06

Applicant: 海南大学

Inventor： 骆彦池 ,  宋凤阁 ,  陈会友 ,  万逸

IPC: C12Q1/686 ,  C12Q1/689 ,  C12N15/11 ,  C12R1/445

Abstract: 本发明公开了一种基于aPCR‑Cas12快速鉴别金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法，属于基因检测技术领域。本发明以nuc为目标基因，利用aPCR扩增出单链ssDNA，根据序列合成互补链PC‑ssDNA，并修饰PClinker基团。二者杂交后紫外处理，切断修饰位点形成立足点双链，联合CRISPR‑Cas12系统提高SNP检测能力，通过读取荧光信号，显著性分析P值实现金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的区分检测。该体系无需PAM位点，能够检测到低至9CUF/mL的目标基因，对混合基因中SNP突变率检测的灵敏度达到0.01％。本发明提供的方法对病原菌监控与防治方面都有重要意义。

公开(公告)号：CN118421765A

公开(公告)日：2024-08-02

申请号：CN202410632776.9

申请日：2024-05-21

Applicant: 海南大学

Inventor： 宋凤阁 ,  骆彦池 ,  陈会友 ,  鲁琳 ,  邵宝凯 ,  林志赟 ,  万逸

IPC: C12Q1/6858

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12系统光激活检测SNP的方法。该方法中，根据待检测(miRNA作为RNA)靶核酸单链信息，设计、合成其PClinker基团修饰的互补ssDNA链，二者杂交后紫外光照射形成立足点，联合CRISPR‑Cas12系统将检测信号转变成荧光信号来实现核酸检测，并且区分单碱基突变。本发明所述方法材料设计简单、成本低、操作方便，并且可以在40min内直接通过荧光信号检测SNP，区分野生型与突变型，对于癌症的个性化生物标记物诊断和基因治疗方面都有重要意义。