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公开(公告)号：CN118853620A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202310462116.6
申请日：2023-04-26
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开一种基于祖先序列重建的糖基转移酶及其应用，所述糖基转移酶基因核苷酸序列全长1485碱基，编码495个氨基酸，其核苷酸序列和氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。该基因能在大肠杆菌表达体系中高效的可溶性表达，由该基因表达的重组酶酶学性质为：以R’‑苯乙醇为底物，该酶的最适反应温度为55℃，最适pH为10.5，并且在55℃以下和pH 7‑11的范围内具有良好的稳定性，在8 h内能维持90%以上的酶活性。本发明还提供了两株突变株M1、M2，活性分别提高了4.68、5.44倍。使用蔗糖合酶McSusy突变体S31D偶联糖基转移酶UGTAn85突变体M2经分批补料反应以2‑苯乙醇为底物最高可生产45.8 g/L 2‑苯乙醇糖苷、以酪醇为底物可生产51.49 g/L红景天苷。
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公开(公告)号：CN115404226B
公开(公告)日：2024-02-23
申请号：CN202110582880.8
申请日：2021-05-27
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/18 , C12P19/60 , C12P19/44 , C12P33/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖合成酶用于酶法制备糖基化天然产物的方法。该方法利用低等真核来源的蔗糖合成酶和UDP‑糖基转移酶，以底物和蔗糖为原料生产糖基化产物。本发明的方法首先利用基因挖掘技术筛选得到具有UDP底物亲和力的蔗糖合成酶，并将其用于与UDP‑葡萄糖基转移酶在同一载体上共表达，然后收集生物酶粗品直接进行底物催化反应，通过新型蔗糖合成酶催化蔗糖实现UDP‑葡萄糖的高效循环，使UDP‑葡萄糖基转移酶具有持续的UDP‑葡萄糖补给催化底物糖基化。该方法与已有的双酶催化反应系统相比，转化速率快，收率高，具有重要且广泛的应用价值。
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公开(公告)号：CN113322219B
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202110188213.1
申请日：2021-02-19
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物法催化合成姜黄素糖苷类化合物的方法。通过将糖基转移酶基因CaUGT2及蔗糖合成酶基因AtSUS1构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中得到重组菌株，此重组菌株进行诱导表达后其可溶性表达量比其他植物来源糖基转移酶有所提高，可对底物姜黄素进行高效催化。所述重组质粒为pRSF‑CaUGT2‑AtSUS1，在Nco I和EcoR I插入蔗糖合成酶AtSUS1基因，在Xho I和NdeI插入糖基转移酶CaUGT2，构成共表达重组质粒pRSF‑CaUGT2‑AtSUS1，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中得到重组菌株CaUGT2‑AtSUS1，重组菌株进行诱导表达后其糖基转移酶CaUGT2可溶性表达量比其他植物来源糖基转移酶有所提高，催化合成姜黄素糖苷类化合物转化率达到98%，催化姜黄素生成姜黄素单糖苷和姜黄素双糖苷，其水溶性优于姜黄素，解决姜黄素水溶性差的问题。底物姜黄素浓度75mM，催化底物浓度较高，更适用于工业化中食品及药品行业。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115404226A
公开(公告)日：2022-11-29
申请号：CN202110582880.8
申请日：2021-05-27
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N9/10 , C12N15/54 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12P19/18 , C12P19/60 , C12P19/44 , C12P33/20 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖合成酶用于酶法制备糖基化天然产物的方法。该方法利用低等真核来源的蔗糖合成酶和UDP‑糖基转移酶，以底物和蔗糖为原料生产糖基化产物。本发明的方法首先利用基因挖掘技术筛选得到具有UDP底物亲和力的蔗糖合成酶，并将其用于与UDP‑葡萄糖基转移酶在同一载体上共表达，然后收集生物酶粗品直接进行底物催化反应，通过新型蔗糖合成酶催化蔗糖实现UDP‑葡萄糖的高效循环，使UDP‑葡萄糖基转移酶具有持续的UDP‑葡萄糖补给催化底物糖基化。该方法与已有的双酶催化反应系统相比，转化速率快，收率高，具有重要且广泛的应用价值。
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公开(公告)号：CN113462670A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110967784.5
申请日：2021-08-23
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶突变体及其催化合成莱鲍迪苷M的方法，所述突变体是在如SEQID NO:1所示的糖基转移酶氨基酸序列的基础上进行突变，对突变菌株诱导表达得到突变酶，以突变酶为催化剂，酶法催化20 g/LRebE合成12.8g/LRebM。突变体S195Q对莱鲍迪苷E和莱鲍迪苷D的动力学参数，突变体米氏常数分别为56.34±2.02μM和214.48±14.54μM，是野生型的1/3和2/5。将糖基转移酶突变体与蔗糖合酶偶联，实现高效催化合成莱鲍迪苷M。本实验构建糖基转移酶UGT76G1或其突变体与蔗糖合酶的重组菌株，实现高效催化合成莱鲍迪苷M。该方法是目前酶法催化合成莱鲍迪苷M实验中产量最优且绿色环保无污染。
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公开(公告)号：CN113322219A
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202110188213.1
申请日：2021-02-19
Applicant: 南京工业大学
Abstract: 本发明公开了一种生物法催化合成姜黄素糖苷类化合物的方法。通过将糖基转移酶基因CaUGT2及蔗糖合成酶基因AtSUS1构建到表达载体上，导入到大肠杆菌中得到重组菌株，此重组菌株进行诱导表达后其可溶性表达量比其他植物来源糖基转移酶有所提高，可对底物姜黄素进行高效催化。所述重组质粒为pRSF‑CaUGT2‑AtSUS1，在Nco I和EcoR I插入蔗糖合成酶AtSUS1基因，在Xho I和NdeI插入糖基转移酶CaUGT2，构成共表达重组质粒pRSF‑CaUGT2‑AtSUS1，将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中得到重组菌株CaUGT2‑AtSUS1，重组菌株进行诱导表达后其糖基转移酶CaUGT2可溶性表达量比其他植物来源糖基转移酶有所提高，催化合成姜黄素糖苷类化合物转化率达到98%，催化姜黄素生成姜黄素单糖苷和姜黄素双糖苷，其水溶性优于姜黄素，解决姜黄素水溶性差的问题。底物姜黄素浓度75mM，催化底物浓度较高，更适用于工业化中食品及药品行业。
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公开(公告)号：CN114875054B
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202210732311.1
申请日：2022-06-24
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/54 , C12N9/10 , C12P19/56 , C12N1/21 , A23L2/60 , A23L27/30 , A23L33/105 , A61K47/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种酶法糖基化甜菊糖苷类化合物方法及其衍生物，在糖基转移酶存在下，将葡萄糖基供体的糖基转移到甜菊糖苷类化合物的C19连接的第一个葡萄糖基的C‑6’上和/或将葡萄糖基供体的糖基转移到甜菊糖苷类化合物的C19连接的第一个葡萄糖基的C‑2’上。糖基化衍生物与相应底物比较，甜味增加、苦味减少，提升了口感品质，是潜在的优质甜味剂，可用作食品中的天然甜味剂、膳食补充剂及药品成分等。该方法是目前酶法优化甜菊糖苷类化合物其甜味剂品质实验中产量高，效果好，方法操作简单，产品副产物极少，绿色环保无污染，生产成本低，适合于工业生产。
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公开(公告)号：CN114875054A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210732311.1
申请日：2022-06-24
Applicant: 南京工业大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/54 , C12N9/10 , C12P19/56 , C12N1/21 , A23L2/60 , A23L27/30 , A23L33/105 , A61K47/26 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种酶法糖基化甜菊糖苷类化合物方法及其衍生物，在糖基转移酶存在下，将葡萄糖基供体的糖基转移到甜菊糖苷类化合物的C19连接的第一个葡萄糖基的C‑6’上和/或将葡萄糖基供体的糖基转移到甜菊糖苷类化合物的C19连接的第一个葡萄糖基的C‑2’上。糖基化衍生物与相应底物比较，甜味增加、苦味减少，提升了口感品质，是潜在的优质甜味剂，可用作食品中的天然甜味剂、膳食补充剂及药品成分等。该方法是目前酶法优化甜菊糖苷类化合物其甜味剂品质实验中产量高，效果好，方法操作简单，产品副产物极少，绿色环保无污染，生产成本低，适合于工业生产。
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