公开(公告)号：CN115404226B

公开(公告)日：2024-02-23

申请号：CN202110582880.8

申请日：2021-05-27

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 贾红华 ,  李艳 ,  马蕊琪 ,  潘华祎 ,  陶叶慧 ,  余杰 ,  林磊 ,  严明

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/60 ,  C12P19/44 ,  C12P33/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种蔗糖合成酶用于酶法制备糖基化天然产物的方法。该方法利用低等真核来源的蔗糖合成酶和UDP‑糖基转移酶，以底物和蔗糖为原料生产糖基化产物。本发明的方法首先利用基因挖掘技术筛选得到具有UDP底物亲和力的蔗糖合成酶，并将其用于与UDP‑葡萄糖基转移酶在同一载体上共表达，然后收集生物酶粗品直接进行底物催化反应，通过新型蔗糖合成酶催化蔗糖实现UDP‑葡萄糖的高效循环，使UDP‑葡萄糖基转移酶具有持续的UDP‑葡萄糖补给催化底物糖基化。该方法与已有的双酶催化反应系统相比，转化速率快，收率高，具有重要且广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN115404226A

公开(公告)日：2022-11-29

申请号：CN202110582880.8

申请日：2021-05-27

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 贾红华 ,  李艳 ,  马蕊琪 ,  潘华祎 ,  陶叶慧 ,  余杰 ,  林磊 ,  严明

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/60 ,  C12P19/44 ,  C12P33/20 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种蔗糖合成酶用于酶法制备糖基化天然产物的方法。该方法利用低等真核来源的蔗糖合成酶和UDP‑糖基转移酶，以底物和蔗糖为原料生产糖基化产物。本发明的方法首先利用基因挖掘技术筛选得到具有UDP底物亲和力的蔗糖合成酶，并将其用于与UDP‑葡萄糖基转移酶在同一载体上共表达，然后收集生物酶粗品直接进行底物催化反应，通过新型蔗糖合成酶催化蔗糖实现UDP‑葡萄糖的高效循环，使UDP‑葡萄糖基转移酶具有持续的UDP‑葡萄糖补给催化底物糖基化。该方法与已有的双酶催化反应系统相比，转化速率快，收率高，具有重要且广泛的应用价值。

公开(公告)号：CN113462670A

公开(公告)日：2021-10-01

申请号：CN202110967784.5

申请日：2021-08-23

Applicant: 南京工业大学

Inventor： 贾红华 ,  李艳 ,  陶叶慧 ,  余杰 ,  林磊 ,  马蕊琪

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/56 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶突变体及其催化合成莱鲍迪苷M的方法，所述突变体是在如SEQID NO:1所示的糖基转移酶氨基酸序列的基础上进行突变，对突变菌株诱导表达得到突变酶，以突变酶为催化剂，酶法催化20 g/LRebE合成12.8g/LRebM。突变体S195Q对莱鲍迪苷E和莱鲍迪苷D的动力学参数，突变体米氏常数分别为56.34±2.02μM和214.48±14.54μM，是野生型的1/3和2/5。将糖基转移酶突变体与蔗糖合酶偶联，实现高效催化合成莱鲍迪苷M。本实验构建糖基转移酶UGT76G1或其突变体与蔗糖合酶的重组菌株，实现高效催化合成莱鲍迪苷M。该方法是目前酶法催化合成莱鲍迪苷M实验中产量最优且绿色环保无污染。