一种猪δ冠状病毒感染性克隆质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN112852873B

    公开(公告)日:2023-03-24

    申请号:CN202110154305.8

    申请日:2021-02-04

    Abstract: 本发明公开了一种猪δ冠状病毒感染性克隆质粒的构建方法,属于动物传染病防治和生物技术领域。本发明基于BAC系统和同源重组一步克隆法拯救PDCoV CHN‑HN‑2014株重组病毒的反向遗传系统,将毒株的5个基因片段一步克隆至中间载体pBAC‑M‑PDCoV中,获得包含PDCoV CHN‑HN‑2014株全长cDNA的重组质粒pBAC‑CHN‑HN‑2014,转染细胞后拯救出重组病毒rCHN‑HN‑2014,从而建立了猪δ冠状病毒反向遗传操作平台,为深入研究PDCoV的感染和致病机制奠定了基础。同时,针对目前我国还没有可用的PDCoV疫苗的实际问题,本发明的PDCoV感染性克隆平台,还可以用于研制更加安全高效的新型PDCoV基因工程疫苗,该平台还可作为活病毒载体,用于多联疫苗的研制,因此本发明对于该病毒相关的研究具有重大价值。

    一种猪干扰素λ4重组蛋白及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN114920817A

    公开(公告)日:2022-08-19

    申请号:CN202210515788.4

    申请日:2022-05-12

    Abstract: 本发明属于生物技术领域,涉及一种猪干扰素λ4重组蛋白及其制备方法和应用。猪干扰素λ4(sIFN‑λ4)重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。将sIFN‑λ4片段连接到质粒中获得重组质粒,sIFN‑λ4的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示;将重组质粒转化大肠杆菌,然后进行菌液培养,并加入IPTG诱导,收集包涵体,溶解、纯化得到重组sIFN‑λ4蛋白。重组sIFN‑λ4蛋白能够诱导大肠杆菌、克雷伯肺炎杆菌和沙门氏菌等革兰氏阴性菌凝集从而阻断它们入侵真核细胞,同时还可以在细胞和动物机体水平抑制猪流行性腹泻病毒的感染。这些结果表明sIFN‑λ4具有阻断细菌感染和抗病毒感染的双重特性。

    猪流行性腹泻病毒抗体捕获ELISA检测方法及应用

    公开(公告)号:CN104862285B

    公开(公告)日:2018-03-06

    申请号:CN201510242555.1

    申请日:2015-05-12

    Abstract: 本发明属于动物免疫学技术领域。具体涉及猪流行性腹泻病毒抗体捕获ELISA检测方法及应用。本发明以抗猪流行性腹泻病(PEDV)N蛋白的单克隆抗体包被酶标板,捕获原核表达的PEDV N蛋白作为抗原建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体的捕获ELISA方法。本发明具有快速简便、特异灵敏等特点,适用于在体外检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体。其中分泌抗PEDV N蛋白单抗的杂交瘤细胞株N2D1保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC NO:C2014174。本发明还公开了在体外猪流行性腹泻病毒抗体检测中的应用。

    一种表达狂犬病病毒G蛋白的重组假型杆状病毒及应用

    公开(公告)号:CN103088063A

    公开(公告)日:2013-05-08

    申请号:CN201110349009.X

    申请日:2011-11-04

    Abstract: 本发明属于病毒学和基因工程技术领域,具体涉及一种表达狂犬病病毒主要免疫原性糖蛋白(RVG)的重组假型杆状病毒的构建、疫苗制备及应用。本发明得到的重组假型杆状病毒含有双表达盒,既含PPH启动子驱动RVG表达并使其展示在病毒粒子囊膜表面的昆虫细胞表达盒,又含CMV启动子驱动RVG在哺乳动物细胞中高效表达的哺乳动物细胞表达盒。用该重组杆状病毒制备的狂犬病疫苗具有亚单位疫苗和活病毒载体疫苗的双重特性。免疫小鼠后,能刺激机体产生高水平的狂犬病病毒特异性ELISA抗体、中和抗体以及IFN-γ,具有潜在的疫苗应用价值。该重组杆状病毒BV-RVG/RVG保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),其保藏编号为CCTCC NO:V201022。本发明还包含了该重组杆状病毒疫苗的制备及应用。

    重组猪伪狂犬病毒-猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒基因工程毒株及应用

    公开(公告)号:CN101457215A

    公开(公告)日:2009-06-17

    申请号:CN200810227851.4

    申请日:2008-12-01

    Abstract: 本发明属于动物病毒基因工程技术领域,具体涉及重组猪伪狂犬病毒-猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒基因工程毒株构建、疫苗制备及应用。获得一株重组猪伪狂犬病毒-猪繁殖与呼吸综合征病毒-猪圆环病毒基因工程毒株E001,缺失了伪狂犬病毒主要毒力基因TK、糖蛋白基因gG、gE和gI,不表达伪狂犬病毒的功能性糖蛋白gG和gE/gI;能同时表达猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株的GP5m/M蛋白抗原和猪繁殖与呼吸综合征病毒国内变异株GP5蛋白及猪圆环病毒的ORF2蛋白。该毒株可刺激猪产生抗伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒攻击的保护性免疫反应,有效防止伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒的感染。还公开了三价基因工程疫苗的制备与应用。

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