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公开(公告)号：CN115353564B
公开(公告)日：2024-03-26
申请号：CN202210944925.6
申请日：2022-08-08
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/10 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/535 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种鸭坦布苏病毒单克隆抗体EDIII‑Mab及其检测试剂盒和应用；该单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC NO：C2022176的杂交瘤细胞株DTMUV‑Mab‑6A7所分泌得到。单抗作为检测抗体的阻断ELISA，建立检测试剂盒，该试剂盒能特异性地识别DTMUV阳性血清，而与其它鸭中常见病毒抗体阳性血清无交叉反应；重复性实验表明，批间和批内的变异系数均小于10％；敏感性结果显示该方法的检测限度可达1：1280，且与间接ELISA的符合率为79.198％，与IFA的符合率为82.707％，符合率为100％；表明该试剂盒在临床应用中具有良好的可行性。
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公开(公告)号：CN109306007B
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN201811121302.9
申请日：2018-09-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于抗体应用技术领域，具体涉及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4蛋白基因工程抗体及应用，本发明提供了一种基因工程抗体，为SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.8所示，这两种蛋白混合后形成“Y”字型抗体，可与猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4蛋白进特异性的结合，该抗体只有一个抗原表位，亲和性好，特异性高，可制备成猪繁殖与呼吸综合征病毒的ELISA试剂，Western‑Blot检测试剂，IFA检测试剂等。本发明提供的可以通过人工合成的方法获得，因此能更方便简捷的获得抗猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4基因工程抗体，有效解决杂交瘤细胞保存成本高、表型易丢失等缺点，同时规避了制备腹水时动物福利问题。
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公开(公告)号：CN103740743B
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201310750497.4
申请日：2013-12-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种表达猪博卡病毒VP2蛋白的重组杆状病毒及其应用，PCR扩增一种猪博卡病毒VP2基因，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示。将扩增到的猪博卡病毒VP2基因插入到杆状病毒转移质粒pFastBacTMHTB的BamHⅠ和XhoⅠ位点构建为重组转移质粒pFastBac HTB-VP2，然后将该重组转移质粒转化至含有杆状病毒骨架质粒的DH10Bac感受态细胞，通过同源重组将VP2基因整合至杆状病毒骨架质粒Bacmid中，提取重组Bacmid DNA转染sf9细胞后获得重组杆状病毒rBV-VP2，保藏号为：CCTCC V201401。在昆虫细胞中大量表达产生VP2蛋白及病毒样颗粒，开发成一种有效的PBoV VLPs亚单位疫苗。
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公开(公告)号：CN108676780B
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN201810822335.X
申请日：2018-07-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物病毒学技术领域。具体涉及一种高效分离猪肠道冠状病毒的方法。所述的猪肠道冠状病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。本发明采用差速离心去杂质、利用聚乙二醇(PEG)6000沉淀浓缩病毒，再通过蔗糖梯度离心纯化病毒等步骤，最大限度降低了病毒样品中的杂质含量，浓缩了病毒。本发明制备的病毒样品尤其适用于接种细胞和分离病毒。相对于现有技术制备的病毒样品，对细胞的毒性大幅度下降，病毒分离率显著提高，分离率可由传统方法的10％左右提高到40％以上。
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公开(公告)号：CN109306007A
公开(公告)日：2019-02-05
申请号：CN201811121302.9
申请日：2018-09-26
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569
Abstract: 本发明属于抗体应用技术领域，具体涉及抗猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4蛋白基因工程抗体及应用，本发明提供了一种基因工程抗体，为SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.8所示，这两种蛋白混合后形成“Y”字型抗体，可与猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4蛋白进特异性的结合，该抗体只有一个抗原表位，亲和性好，特异性高，可制备成猪繁殖与呼吸综合征病毒的ELISA试剂，Western-Blot检测试剂，IFA检测试剂等。本发明提供的可以通过人工合成的方法获得，因此能更方便简捷的获得抗猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4基因工程抗体，有效解决杂交瘤细胞保存成本高、表型易丢失等缺点，同时规避了制备腹水时动物福利问题。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108676780A
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201810822335.X
申请日：2018-07-24
Applicant: 华中农业大学
CPC classification number: C12N7/00 , C12N2770/20051
Abstract: 本发明属于动物病毒学技术领域。具体涉及一种高效分离猪肠道冠状病毒的方法。所述的猪肠道冠状病毒包括猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)。本发明采用差速离心去杂质、利用聚乙二醇(PEG)6000沉淀浓缩病毒，再通过蔗糖梯度离心纯化病毒等步骤，最大限度降低了病毒样品中的杂质含量，浓缩了病毒。本发明制备的病毒样品尤其适用于接种细胞和分离病毒。相对于现有技术制备的病毒样品，对细胞的毒性大幅度下降，病毒分离率显著提高，分离率可由传统方法的10％左右提高到40％以上。
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公开(公告)号：CN107304417A
公开(公告)日：2017-10-31
申请号：CN201610261530.0
申请日：2016-04-25
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N7/00 , A61K39/215 , A61P31/14 , A61P1/12 , C12Q1/70
Abstract: 本发明属于动物病毒学与动物传染病技术领域，具体涉及一株猪流行性腹泻病毒变异弱毒株及应用。该弱毒株为猪流行性腹泻病毒AJ1102-R株(保藏号CCTCC NO:V201433)，经细胞传代、蚀斑克隆和培育证明增殖性能稳定。该弱毒株的基因组序列出现下述突变：第96代在3’UTR的第71～72位发生序列突变，缺失了2个碱基TT；在位于S基因的第3805～3816位存在序列突变，添加了12个碱基GATGCTATTGTT。该弱毒株的免疫效力可以诱导免疫仔猪产生高水平的中和抗体和足够攻毒保护，可以作为疫苗株应用。
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公开(公告)号：CN104862285A
公开(公告)日：2015-08-26
申请号：CN201510242555.1
申请日：2015-05-12
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/577 , G01N33/543
Abstract: 本发明属于动物免疫学技术领域。具体涉及猪流行性腹泻病毒抗体捕获ELISA检测方法及应用。本发明以抗猪流行性腹泻病(PEDV)N蛋白的单克隆抗体包被酶标板，捕获原核表达的PEDV N蛋白作为抗原建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体的捕获ELISA方法。本发明具有快速简便、特异灵敏等特点，适用于在体外检测猪血清中的猪流行性腹泻病毒抗体。其中分泌抗PEDV N蛋白单抗的杂交瘤细胞株N2D1保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：C2014174。本发明还公开了在体外猪流行性腹泻病毒抗体检测中的应用。
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公开(公告)号：CN115746130A
公开(公告)日：2023-03-07
申请号：CN202211259773.2
申请日：2022-10-14
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K16/10 , C12N5/20 , G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/543 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种鸭呼肠孤病毒单克隆抗体NDRV‑σC及其检测试剂盒和应用；它是由保藏编号为CCTCC NO：C2022276的杂交瘤细胞株NDRV‑MAb‑7C6所分泌得到。所述试剂盒包括上述的鸭呼肠孤病毒单克隆抗体NDRV‑σC。本发明采用原核表达系统表达和纯化了鸭呼肠孤病毒σC蛋白，该蛋白主要以包涵体的形式存在，纯化效果良好。本发明经间接Elisa筛选到的单克隆抗体7C6，具有很强的特异性和很高的效价，效价可达28。本发明使用单克隆抗体7C6作为阻断抗体建立了阻断ELISA抗体检测的方法，该方法能特异性地识别NDRV阳性血清，而与其它鸭常见病抗体阳性血清无交叉反应，具有良好的特异性。
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公开(公告)号：CN110540954A
公开(公告)日：2019-12-06
申请号：CN201910420946.6
申请日：2019-05-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域。具体涉及对三种猪肠道冠状病毒均易感的猪回肠上皮细胞株。通过对IPI-2I细胞的克隆筛选，获得了一株对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪δ冠状病毒(PDCoV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)均敏感的细胞株IPI-FX，该细胞株保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC NO：C2019115。PEDV、PDCoV和TGEV均能在IPI-FX细胞上有效增殖，增殖滴度均高于106.0TCID50/mL。为深入开展猪肠道冠状病毒的免疫与致病机制及混合感染等的研究提供了有用的细胞，在IPI-FX细胞上开展相关研究能更好地反映猪体感染时的真实情况。
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