公开(公告)号：CN104099298A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201310127883.8

申请日：2013-04-12

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  陈月平 ,  史晓娜 ,  周云朵

IPC: C12N5/20 ,  C07K16/08 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种犬细小病毒乳胶检测试剂及检测方法和应用，将羧化乳胶20μL与200μL稀释度为1:1~8的单克隆抗体室温作用3-8h致敏后，得到一种犬细小病毒乳胶检测试剂，该试剂可与犬细小病毒特异性反应，重复性好，灵敏度高，乳胶诊断试剂的检测限为1.0×104PFU，本发明的检测方法不需要任何特殊的仪器设备，有利于推广和普及，检测成本低的特点，操作简单，不需要由专业人员操作。本发明检测试剂保存期长，稳定性好，特别适于体外犬细小病毒的快速检测及其相关试剂盒的开发。

公开(公告)号：CN102329776B

公开(公告)日：2013-02-27

申请号：CN201110203504.X

申请日：2011-07-20

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  商琦 ,  高觉婧 ,  贾贵英 ,  陈焕春

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  C12N15/85 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种表达Nectin-1基因胞外区片段的PK-15细胞系PK15-nectin-1-ecto的构建。将猪肝脏组织中的Nectin-1胞外区完整编码区序列克隆到慢病毒核心载体pLenti-7.3CA质粒，成功构建了pLenti7.3CA-nectin-1-ecto重组质粒，将重组质粒和另外三个辅助质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共同转染包装细胞人胚肾细胞293FT，获得HIV慢病毒粒子，将慢病毒粒子用低速离心的方法转导PK-15细胞，得到能够稳定表达猪pLenti7.3CA-nectin-1-ecto的PK-15细胞系PK15-nectin-1-ecto。PK15-nectin-1-ecto细胞系含有Nectin-1基因胞外区片段，该细胞系获得抗伪狂犬病毒的能力。

公开(公告)号：CN1244692C

公开(公告)日：2006-03-08

申请号：CN03156706.1

申请日：2003-09-08

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈焕春 ,  刘正飞 ,  吴斌 ,  金梅林 ,  方六荣 ,  何启盖 ,  周复春

IPC: C12N7/01 ,  A61K39/205 ,  A61P31/20

Abstract: 本发明公开了一种三基因缺失的重组伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PrV)毒株的构建、用该毒株制备的疫苗、构建该毒株的方法以及制备该疫苗方法，所说的重组伪狂犬病毒株缺失了TK、gE、gI基因，且不含外源基因。所说的疫苗属于含有本发明的病毒液和明胶制成的冻干活疫苗。本发明的重组-突变株遗传稳定，不会返强。本发明还包括将所说的活疫苗接种于仔猪、育肥猪、妊娠母猪上，获得了明显的免疫效果。所述疫苗的生物安全性好，适用于伪狂犬病的防制。

公开(公告)号：CN119409776A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411565050.4

申请日：2024-11-05

Applicant: 华中农业大学 ,  刘正飞

Inventor： 刘正飞 ,  王群 ,  张建东 ,  胡红霞 ,  张颖蕾 ,  程珍 ,  李林涛 ,  陈焕春

IPC: C07K14/03 ,  C07K16/08 ,  C12N15/38 ,  C12N15/70 ,  A61K39/245 ,  A61P31/22

Abstract: 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒多表位多肽的制备方法及其应用，属于兽用生物制品技术领域。所述多表位多肽包括：细胞毒性T细胞表位，辅助性T细胞表位和线性B细胞表位；所述细胞表位是使用免疫信息学方法从伪狂犬病毒关键免疫原性蛋白中筛选得到。本发明所设计的猪伪狂犬病毒多表位多肽安全性高，具有较好的抗原性及理化性质，能够高效表达，且能够被伪狂犬病毒特异性抗体识别。应用猪伪狂犬病毒多表位多肽，能够持续诱导产生高水平的特异性抗体和细胞免疫反应，产生强大的保护效力，能够保护小鼠在感染致死剂量的猪伪狂犬病毒时免于死亡。因此本发明公开的多表位多肽可以作为猪伪狂犬病毒疫苗的备选抗原，避免了活毒的使用，为猪伪狂犬病毒的根除提供工具。

公开(公告)号：CN107619833A

公开(公告)日：2018-01-23

申请号：CN201710696023.4

申请日：2017-08-14

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  郑可 ,  汪洋 ,  李娜

IPC: C12N15/74 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种用于构建布鲁氏菌突变株的质粒pZF17-30及其构建方法和应用，构建过程主要包括从商业化质粒pCMV-BE3中扩增rAPOBEC1-nCas9-UGI片段，并将该片段与含有泛宿主复制子pBBR1-MCS-5和非特异性sgRNA的载体通过重组反应整合到一起，随后将ccdB基因与Chl抗性基因插入sgRNA中；利用限制性内切酶BsaI酶切质粒pZF17-30，将特异性sgRNA与线性化pZF17-30连接，构建的载体的序列如SEQ ID NO.3所示，该载体可用于构建布鲁氏菌突变株，将virB10基因CDS区478位碱基由C突变为T。

公开(公告)号：CN104120109A

公开(公告)日：2014-10-29

申请号：CN201310153641.6

申请日：2013-04-28

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  王单晶 ,  范强

IPC: C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒gB抗体检测阻断ELISA试剂盒及用途，试剂盒采用已灭活的纯化BHV-1病毒粒子作为包被抗原,依据阻断ELISA原理检测牛血清中牛传染性鼻气管炎病毒的抗体。试剂盒中96孔板中的包被抗原为灭活的纯化BHV-1病毒粒子,其具有良好的抗原性。试剂盒包括杂交瘤细胞株、ELISA板条、血清稀释液和浓缩洗涤液、终止液、底物显色液A、底物显色液B、阳性对照、阴性对照。该试剂盒敏感性强，特异性高，使用方便，易于标准化，尤其适用于大规模样品的检测，可以作为调查牛传染性鼻气管炎流行情况的金标准。与美国IDEXXgE阻断试剂盒相比，有很高阳性符合率及阴性符合率，可以作为诊断牛传染性鼻气管炎的标准方法。

公开(公告)号：CN102649948A

公开(公告)日：2012-08-29

申请号：CN201110043444.X

申请日：2011-02-23

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 刘正飞 ,  定明 ,  范强 ,  郭爱珍 ,  高觉婧 ,  陈焕春

IPC: C12N7/01 ,  A61K39/265 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于动物传染病基因工程技术领域。具体涉及一种牛传染性鼻气管炎ΔTK/ΔgE基因缺失标志活疫苗及制备方法。该毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：V201104。所述的重组牛传染性鼻气管炎病毒毒株缺失了TK和gE基因，插入了EGFP表达盒。制备的牛传染性鼻气管炎ΔTK/ΔgE基因缺失标志活疫苗毒力大大降低，潜伏的病毒也不易被激活，具有很高的安全性。此外，除了被缺失的TK和gE基因，该缺失毒株仍能表达其他所有毒力基因，具有很好的免疫原性。

公开(公告)号：CN101818130B

公开(公告)日：2012-07-25

申请号：CN200910273357.6

申请日：2009-12-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  张敏敏 ,  刘正飞 ,  付书林 ,  陈焕春

IPC: C12N7/00 ,  A61K39/265 ,  A61P31/20 ,  C12N7/01 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于动物病毒学和动物基因工程技术领域，具体涉及一种gG和TK基因缺失的重组牛传染性鼻气管炎病毒、基因工程疫苗及应用。本发明制备的重组牛传染性鼻气管炎病毒毒株IBRVΔgG/ΔTK保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：V200915，该毒株缺失了gG、TK基因，不含外源基因。本发明的中间毒株即重组牛传染性鼻气管炎病毒GAZH-2009-01，保藏在中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO：V200910，该毒株缺失了gG、TK基因并含有报告基因EGFP。本发明还公开了重组牛传染性鼻气管炎病毒IBRVΔgG/ΔTK在牛传染性鼻气管炎的基因工程疫苗的制备上应用和防治牛传染性鼻气管炎病毒病上的应用。

公开(公告)号：CN1605629A

公开(公告)日：2005-04-13

申请号：CN200310100114.5

申请日：2003-10-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 陈焕春 ,  顾贫 ,  曹胜波 ,  钱平 ,  唐勇 ,  金梅林 ,  吴斌 ,  方六荣 ,  刘正飞 ,  吕建强

IPC: C12P19/34 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C07H21/00 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明涉及口蹄疫病毒的非结构蛋白基因3ABC；用该基因构建的原核表达载体；将该载体转化至大肠杆菌BL21而筛选得到的重组表达菌株(Escherichia coli BL21/pKG3ABC)；利用该表达菌株表达口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC及其表达蛋白的纯化方法；利用表达蛋白建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别诊断方法。发明所包括的重组表达菌株Escherichia coli BL21/pKG3ABC，保藏在CCTCC，保藏日期：2003年9月12日，保藏编号：CCTCC：M203068。

公开(公告)号：CN119684445A

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202411906338.3

申请日：2024-12-23

Applicant: 华中农业大学 ,  刘正飞

Inventor： 刘正飞 ,  蔡国华 ,  柯文婷 ,  王群 ,  郭超越 ,  张建东 ,  郭凯旋 ,  周艳君 ,  孙圣福 ,  陈焕春

IPC: C07K16/12 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  C12N15/13

Abstract: 本发明涉及生物检测的技术领域，具体涉及一株具有竞争效果的抗布鲁氏菌脂多糖的单克隆抗体及其应用。所述单克隆抗体能与羊种布鲁氏菌、牛种布鲁氏菌以及猪种布鲁氏菌发生特异性反应，且不与大肠杆菌、沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌发生特异性反应。牛羊布鲁氏菌抗体阳性血清对该单克隆抗体与布鲁氏菌脂多糖的结合具有抑制作用，能用于建立布鲁氏菌抗体竞争ELISA检测方法。本发明涉及的抗布鲁氏菌脂多糖的单克隆抗体及其应用，为我国布鲁氏菌病的检测技术开发提供坚实的物质和技术支撑。