公开(公告)号：CN119040297A

公开(公告)日：2024-11-29

申请号：CN202411096626.7

申请日：2024-08-11

Applicant: 华中农业大学 ,  湖北洪山实验室

Inventor： 谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  徐兵荣 ,  陶大刚 ,  李晟 ,  阮进学 ,  赵长志 ,  刘小磊

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  C12N15/867

Abstract: 本发明公开了一种Ⅱ‑B型核酸内切酶介导的基因编辑系统及用途，具体地，本发明利用宏基因组学结合实验鉴定出一种属于Ⅱ‑B型Cas9家族的Gs9‑1核酸酶，其识别含有NGG的PAM序列，且引导RNA（sgRNA）需要特定的骨架序列。本发明还建立了基于Gs9‑1核酸酶介导的基因组靶向编辑技术，在对基因组序列进行精确修饰，诱导基因组中的插入、缺失或碱基替换的技术领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN116676291B

公开(公告)日：2024-02-27

申请号：CN202211017110.X

申请日：2022-08-22

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 赵书红 ,  谢胜松 ,  李新云 ,  陶大刚 ,  徐兵荣 ,  李晟 ,  阮进学 ,  赵长志

IPC: C12N9/22 ,  C07K19/00 ,  C12N15/55 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/6876 ,  C12R1/19

Abstract: LtGs12‑1或AfGs12‑1蛋白介导的核酸裸眼可视本发明公开了CRISPR/Cas系统中核酸内切 化检测与基因组定向编辑技术，在基因组定点修酶Genie scissor及其介导的基因编辑系统。具 饰与核酸检测领域具有广阔的应用前景。体地，本发明提供了一种基于宏基因组学方法挖掘到的新型向导RNA依赖型核酸内切酶Genie scissor，特别是新发现来自氨基酸球菌科的(56)对比文件Julijia Dronina等.Towards applicationof CRISPR-Cas12a in the design of modernviral DNA detection tools 《.JNanobiotechenology》.2022,第20卷(第1期),第41篇.赵波等.CRISPR/Cas9系统在植物育种中的应用《.热带作物学报》.2018,(第01期),第202-212页.

公开(公告)号：CN116144631A

公开(公告)日：2023-05-23

申请号：CN202310086152.7

申请日：2023-01-17

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  李晟 ,  徐兵荣 ,  陶大刚 ,  付亮亮 ,  阮进学 ,  王恒 ,  马云龙

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/6816

Abstract: 本发明公开了一种高活性和耐热性高的核酸内切酶及其介导的基因编辑系统，具体地，本发明提供了一种利用宏基因组学结合实验鉴定出的温度适用范围广的核酸内切酶Gs12‑7，其优点在于蛋白温度耐受性高，识别含有BTYV的PAM序列，因而具有更大基因编辑空间且在基因组中高活性高特异切割靶标DNA。本发明建立了基于CRISPR/Gs12‑7系统介导的核酸可视化检测与基因组靶向编辑技术，在基因组定点修饰与核酸检测领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN113637730B

公开(公告)日：2024-02-09

申请号：CN202111059118.8

申请日：2021-09-09

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 赵书红 ,  李新云 ,  赵长志 ,  谢胜松 ,  周媛 ,  张金福 ,  陶大刚 ,  徐兵荣 ,  韩晓松 ,  阮进学

IPC: C12Q1/6844 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种等温扩增技术结合核酸外切酶介导的可视化核酸检测方法，利用等温扩增技术扩增待检测核酸，Exo III剪切扩增子3’末端序列暴露单链DNA靶标，茎环探针结合靶标，Exo III能够剪切探针3’末端并释放荧光基团，通过裸眼或横向流动试纸条可快速、灵敏地检测病毒核酸。该方法无需特殊检测装置，检测速度快、灵敏性高、成本低，且在室温条件下均可完成检测，裸眼和试纸条可视化过程在25~30 min内完成，检测灵敏度可达到2个拷贝。

公开(公告)号：CN113308577A

公开(公告)日：2021-08-27

申请号：CN202110650339.6

申请日：2021-06-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 郭爱珍 ,  姜传文 ,  谢胜松 ,  陈颖钰 ,  耿元晨 ,  陶大刚 ,  徐兵荣 ,  胡长敏 ,  陈建国 ,  陈曦

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的可视化快速核酸检测方法，该方法针对牛结节性皮肤病病毒的orf068基因设计RPA引物并进行扩增，然后向扩增产物中加入Cas12a蛋白并进行酶切反应，反应体系包括Cas12a蛋白、sgRNA和核酸探针，即可对核酸探针发出的信号进行检测。本发明检测orf068质粒的灵敏度是5copies/μL,检测LSDV和山羊痘病毒(GTPV)的灵敏度均为0.1TCID50/μL，检测临床样本的诊断敏感性为96.3％(95％CI：81.0％，99.9％)，且特异性高，眼观颜色变化判断结果，具有简便、快速和适合现场检测等优点。

公开(公告)号：CN119351620A

公开(公告)日：2025-01-24

申请号：CN202411283397.X

申请日：2024-09-12

Applicant: 湖北洪山实验室 ,  华中农业大学

Inventor： 谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  陶大刚 ,  徐兵荣 ,  阮进学

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPR/Gs12系统介导的多重核酸检测技术及应用，将不同Gs12核酸酶分别与相对应的特异crRNA和单链DNA报告基因进行组合，进而联合重组酶聚合酶扩增（RPA）方法，即可实现靶标核酸分子的四重、三重或二重特异准确检测。并由此开发了能同时区分塞内卡病毒（SVA）、猪瘟病毒（CSFV）、非洲猪瘟病毒（ASFV）的核酸检测技术与试剂盒。本发明方法可实现靶标核酸的快速多重检测，在核酸检测领域具有良好的推广应用价值。

公开(公告)号：CN116410955B

公开(公告)日：2023-12-19

申请号：CN202310247616.8

申请日：2023-03-10

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  孙昊文 ,  赵长志 ,  陶大刚 ,  徐兵荣 ,  李晟

IPC: C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12Q1/6818 ,  C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了两种CRISPR/Cas系统的新型核酸内切酶及其应用，具体地，本发明首次提供了两种结合宏基因组学与实验手段挖掘到的新型CRISPR/Cas12a系统家族新成员Gs12‑3、Gs12‑5，特别是新发现的Gs12‑3与已知Cas12a蛋白相比具有覆盖靶标位点范围更广的基因组编辑能力，还建立了基于CRISPR/Gs12‑3系统介导的核酸可视化检测技术。

公开(公告)号：CN116904477A

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202311069870.X

申请日：2023-08-23

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 赵书红 ,  阮进学 ,  熊友才 ,  谢胜松 ,  李新云 ,  韩晓松 ,  席晓宁 ,  刘海龙 ,  徐兵荣

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/47 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/867 ,  A01K67/027 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了利用单碱基编辑饱和点突变文库筛选并鉴定的CALR基因突变体及其在猪抗乙型脑炎病毒中的应用，利用piggyBac转座系统构建了ancBE4max核酸酶稳定表达的猪源PK‑15细胞，并制备了覆盖CALR基因全部外显子和内含子的碱基突变细胞库，通过接种JEV诱导细胞死亡进行表型筛选，鉴定到CALR基因第764‑767位碱基由GGGG连续突变为AAAA能抑制JEV复制但是不影响CALR基因自身蛋白表达，该突变位点可作为抑制JEV感染的有效抗病靶点，在猪的抗病育种和药物治疗方面具有较大的推广应用价值。

公开(公告)号：CN114196745B

公开(公告)日：2023-09-15

申请号：CN202111558508.X

申请日：2021-12-17

Applicant: 中华人民共和国洋山海关 ,  华中农业大学

Inventor： 蒋羽 ,  蒋静 ,  何俊杰 ,  谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  徐兵荣 ,  肖箫 ,  陶大刚

IPC: C12Q1/6876 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明提供了一种基于等温扩增结合CRISPR‑Cas12a系统的可视化检测鱼粉中牛源成分的试剂盒及方法，所述的试剂盒包含LAMP引物组合、Cas12a蛋白、crRNA以及荧光标记的单链DNA报告分子，本发明所述的方法具有特异性强、灵敏度高和设备要求低的优点，可检测鱼粉中是否含有牛源成分，能有效提高海关进出口鱼粉掺杂查验效率。

公开(公告)号：CN111235232B

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202010060317.X

申请日：2020-01-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 谢胜松 ,  赵书红 ,  李新云 ,  刘向东 ,  陶大刚 ,  刘佳佳 ,  徐兵荣 ,  聂雄伟

IPC: C12Q1/6844

Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPR‑Cas12a系统的可视化快速核酸检测方法及应用。具体地，本发明的用于检测靶标核酸分子的荧光或裸眼可视化的检测体系，包括：(a)Cas12a蛋白；(b)sgRNA，所述sgRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于靶标核酸分子；和(c)核酸探针，所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号。本发明检测体系和检测方法具有快速、灵敏、高特异、裸眼可视化、适合现场快速检测等优点。