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公开(公告)号：CN118581153A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202411060118.3
申请日：2024-08-05
Abstract: 本发明属于基因编辑技术领域，具体涉及DNA聚合酶介导的核苷酸序列编辑方法及组合物。本发明发现，细胞内源性DNA聚合酶能够介导核酸酶对靶核苷酸的编辑。这样能够在保证碱基效果的同时，避免来自于病毒或者细菌的细胞外源逆转录酶或者聚合酶所存在的免疫原应、低保真性等安全性问题。同时，也能够减少或避免外源性DNA聚合酶的使用，从而降低了递送难度。因而，本发明创建一种新型的更安全更容易递送的基因编辑工具及方法，为实现基因编辑技术在动物遗传性状改良、基因编辑育种与遗传疾病治疗等多个领域的开发应用提供了进一步的技术支持。
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公开(公告)号：CN114107311B
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202111168854.7
申请日：2021-09-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/867 , C12N5/10 , C12N15/113 , A61K31/7088 , A61K45/00 , A61P31/14 , A61P31/16 , A61P31/22
Abstract: 本发明公开了一类参与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）感染的靶点及其应用，利用猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库技术，高通量筛选参与TGEV感染作用的靶点。实验证明，利用CRISPR/Cas9技术敲除候选靶点，能显著抑制TGEV的复制能力，特别是构建了TMEM41B、LPP、TAX1BP1和BARHL2敲除细胞株，并通过实验证明敲除这些基因能赋予宿主细胞TGEV的抗性，还发现敲除TMEM41B能抑制猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪萨佩洛病毒（PSV）、水疱性口炎病毒(VSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、日本乙型脑炎病毒（JEV）和A型流感病毒（IAV）复制。
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公开(公告)号：CN116410955B
公开(公告)日：2023-12-19
申请号：CN202310247616.8
申请日：2023-03-10
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N9/22 , C12N15/55 , C12Q1/6818 , C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了两种CRISPR/Cas系统的新型核酸内切酶及其应用，具体地，本发明首次提供了两种结合宏基因组学与实验手段挖掘到的新型CRISPR/Cas12a系统家族新成员Gs12‑3、Gs12‑5，特别是新发现的Gs12‑3与已知Cas12a蛋白相比具有覆盖靶标位点范围更广的基因组编辑能力，还建立了基于CRISPR/Gs12‑3系统介导的核酸可视化检测技术。
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公开(公告)号：CN112280802A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011227220.X
申请日：2020-11-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达BE4蛋白的猪肾上皮细胞系的制备方法，以传代良好的猪肾上皮细胞（PK‑15）为宿主细胞，共转染含BE4融合蛋白序列的piggyBac转座子（PB‑BE4max）载体和转座酶表达载体质粒，经过嘌呤霉素筛选阳性细胞群，然后挑选单克隆细胞系，并通过扩增BE4的特征片段以及转染活性sgRNA验证编辑活性，从而得到的稳定表达BE4蛋白的转化体。利用上述方法制备的猪肾上皮细胞系能稳定表达BE4蛋白，在猪基因组功能研究、转基因猪制备、抗药靶点筛选等猪基因工程领域具有重要的应用价值。
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公开(公告)号：CN110358792A
公开(公告)日：2019-10-22
申请号：CN201910658641.9
申请日：2019-07-19
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/90 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种将外源基因定点整合至ACTB（beta-actin）基因下游的打靶载体，所述的打靶载体是以ACTB基因终止密码子上下游的部分序列为左、右同源臂，将左同源臂、2A剪切肽序列、外源基因序列和右同源臂依次连接起来并构建到真核表达载体或克隆载体骨架上。将该打靶载体与含特异性靶向猪ACTB基因下游的CRISPR/Cas9切割载体共转染至猪真核细胞中，实验及测序检测证实该外源基因定点整合至ACTB基因下游。本发明提供的这一打靶位点，可以拓宽外源基因在猪基因组中整合位点的范围，为制备外源基因高效稳定表达的转基因猪奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109486916A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201710809360.X
申请日：2017-09-10
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6858
CPC classification number: C12Q1/6858 , C12Q1/683 , C12Q2545/114
Abstract: 本发明提供了一种检测等位基因差异表达的方法。具体地，本发明首次基于荧光基团标记引物策略扩增待测基因，利用限制性内切酶酶切的方法进行定量，并通过测定所述第二扩增产物LA的可检测标记的数量MLA与所述第二扩增产物LG的可检测标记的数量MLG，从而检测所述等位基因的差异表达。
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公开(公告)号：CN109207515A
公开(公告)日：2019-01-15
申请号：CN201710533398.9
申请日：2017-07-03
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/90 , C40B40/02 , C40B50/06
CPC classification number: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/68 , C40B40/02 , C40B40/06 , C40B50/06 , C12N15/907 , C12N2310/10 , C12N2810/10
Abstract: 本发明提供了一种设计和构建猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库的方法。具体地，本发明首次开发一种针对猪全基因组水平蛋白编码基因、lincRNA和miRNA设计特异性sgRNA，并由此构建CRISPR/Cas9的慢病毒敲除文库的方法，可利用该策略实现高通量筛选猪的功能基因。
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公开(公告)号：CN108265103A
公开(公告)日：2018-07-10
申请号：CN201611270166.0
申请日：2016-12-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6869
Abstract: 本发明公开了一种猪线粒体基因组靶向序列捕获试剂盒及其应用，该试剂盒包括靶向猪线粒体基因组序列的捕获探针，所述的捕获探针由生物素标记的核苷酸序列组成，核苷酸序列如SEQ ID NO：1-106所示，获取猪线粒体基因组序列的方法包括以下步骤：1）提取猪的基因组DNA；2）构建猪的全基因组文库；3）与捕获探针液相杂交、测序、序列拼接，即可获取猪线粒体基因组序列，该方法尤其适用于靶向捕获猪古DNA中线粒体基因组序列，其灵敏度高，特异性强，且稳定性好，与核酸文库结合捕获效率更高，覆盖度能达到99.99%，且检测成本低。
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公开(公告)号：CN119040297A
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202411096626.7
申请日：2024-08-11
IPC: C12N9/22 , C12N15/113 , C12N15/867
Abstract: 本发明公开了一种Ⅱ‑B型核酸内切酶介导的基因编辑系统及用途，具体地，本发明利用宏基因组学结合实验鉴定出一种属于Ⅱ‑B型Cas9家族的Gs9‑1核酸酶，其识别含有NGG的PAM序列，且引导RNA（sgRNA）需要特定的骨架序列。本发明还建立了基于Gs9‑1核酸酶介导的基因组靶向编辑技术，在对基因组序列进行精确修饰，诱导基因组中的插入、缺失或碱基替换的技术领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN118873665A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202411038821.4
申请日：2021-09-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: A61K45/00 , A61K31/7088 , A61P31/14 , A61P31/22 , A61P31/16 , C12N15/113 , C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明是申请号为202111168854.7，发明名称为“参与猪传染性胃肠炎病毒感染的靶点及其应用”的中国发明的分案申请。本发明利用猪全基因组CRISPR/Cas9敲除文库技术高通量筛选出参与猪传染性胃肠炎病毒TGEV感染作用的靶点BARHL2，实验证明，利用CRISPR/Cas9技术敲除BARHL2基因能显著抑制TGEV编码的N蛋白表达，TGEV含量显著降低。
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