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公开(公告)号：CN110624115B
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201910848326.2
申请日：2019-09-09
Applicant: 华中农业大学
IPC: A61K48/00 , A61K45/00 , A61P25/00 , A61P31/14 , C12N5/10 , C12N15/90 , C12N9/22 , C12N15/861 , C12N15/867 , C12N15/864 , C12Q1/6851 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种钙网蛋白(CALR)的应用，用于抑制病毒尤其是日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在宿主细胞中复制,从而抵抗JEV病毒复制引起的疾病，提供针对流行性乙型脑炎的抗病性。本发明还提供了一种对抗病毒感染的细胞株和一种非人哺乳动物的抗流行性乙型脑炎动物模型及其制备方法。CALR在哺乳动物中高度保守，因此可以广泛应用于人畜共患传染疾病的预防与治疗，同时可以作为基因编辑动物设计的潜在靶点，减少药物滥用，避免疫情发生，具有丰富的经济价值。
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公开(公告)号：CN110592172A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201911040376.4
申请日：2019-10-29
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明提供了利用CRISPR/Cas9敲除文库技术筛选JEV抗性基因的方法与靶点。具体地，本发明提供了一种基于全基因组CRISPR/Cas9敲除文库策略，筛选JEV抗性相关基因的方法及候选靶基因。本发明方法先利用一个包含有针对猪全基因组的sgRNA质粒库包装慢病毒，感染Cas9稳定表达的猪体细胞，通过流式细胞术富集获得全基因组基因敲除细胞库。再利用JEV感染敲除细胞库，收集存活细胞，提取基因组DNA并进行PCR扩增，建库和高通量测序，最后利用生物信息学分析获得数十个JEV抗性候选功能基因。本发明建立了基于全基因CRISPR/Cas9敲除文库策略筛选猪的JEV抗病基因的方法，所鉴定的候选基因靶点可用于抑制JEV复制的靶向药物开发与抗病育种研究。
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公开(公告)号：CN110592172B
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN201911040376.4
申请日：2019-10-29
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明提供了利用CRISPR/Cas9敲除文库技术筛选JEV抗性基因的方法与靶点。具体地，本发明提供了一种基于全基因组CRISPR/Cas9敲除文库策略，筛选JEV抗性相关基因的方法及候选靶基因。本发明方法先利用一个包含有针对猪全基因组的sgRNA质粒库包装慢病毒，感染Cas9稳定表达的猪体细胞，通过流式细胞术富集获得全基因组基因敲除细胞库。再利用JEV感染敲除细胞库，收集存活细胞，提取基因组DNA并进行PCR扩增，建库和高通量测序，最后利用生物信息学分析获得数十个JEV抗性候选功能基因。本发明建立了基于全基因CRISPR/Cas9敲除文库策略筛选猪的JEV抗病基因的方法，所鉴定的候选基因靶点可用于抑制JEV复制的靶向药物开发与抗病育种研究。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110624115A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201910848326.2
申请日：2019-09-09
Applicant: 华中农业大学
IPC: A61K48/00 , A61K45/00 , A61P25/00 , A61P31/14 , C12N5/10 , C12N15/90 , C12N9/22 , C12N15/861 , C12N15/867 , C12N15/864 , C12Q1/6851 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种钙网蛋白(CALR)的应用，用于抑制病毒尤其是日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)在宿主细胞中复制,从而抵抗JEV病毒复制引起的疾病，提供针对流行性乙型脑炎的抗病性。本发明还提供了一种对抗病毒感染的细胞株和一种非人哺乳动物的抗流行性乙型脑炎动物模型及其制备方法。CALR在哺乳动物中高度保守，因此可以广泛应用于人畜共患传染疾病的预防与治疗，同时可以作为基因编辑动物设计的潜在靶点，减少药物滥用，避免疫情发生，具有丰富的经济价值。
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公开(公告)号：CN110607280A
公开(公告)日：2019-12-24
申请号：CN201910806212.1
申请日：2019-08-28
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/867 , C12N15/90 , A61K45/00 , A61P31/14
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及EMC3基因的应用及其定点敲除方法，通过基因编辑技术靶向修饰EMC3基因，改变编码区的碱基导致其发生移码突变，进而得到EMC3基因敲除细胞株。实验证明，在猪源肾细胞（PK-15）中改变EMC3基因的核苷酸序列使EMC3蛋白表达缺失，可显著干扰流行性乙型脑炎病毒（JEV）的增殖，从而能有效保护宿主细胞免受JEV感染入侵诱导死亡。多序列比对分析发现，EMC3基因序列在猪、人和小鼠中高度保守。因此，EMC3基因可作为抗乙型脑炎的基因编辑靶点或用于抗乙型脑炎病毒药物的开发。
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公开(公告)号：CN115704016A
公开(公告)日：2023-02-17
申请号：CN202110927367.8
申请日：2021-08-10
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用dCas9‑p450系统进行定点突变的方法。本发明具体地公开了一种将细胞色素p450氧化酶(CYP)家族的关键酶CYP3A4蛋白与dCas9(dead Cas9)蛋白融合形成的融合蛋白及dCas9‑P450系统，所述dCas9‑P450系统包括重组载体dCas9‑p450、sgRNA表达载体、黄曲霉毒素B1(AFB1)，并公开了利用该系统将p450酶在特定基因组区域高表达，从而使得该区域的AFB1代谢成为AFBO，AFBO与靶位点DNA形成络合物，在靶位点定点引入随机突变的方法。利用该方法可以突变特定核苷酸序列，为基因功能研究提供可行的方法和强大、灵活的基因编辑工具。
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公开(公告)号：CN111235232B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN202010060317.X
申请日：2020-01-19
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPR‑Cas12a系统的可视化快速核酸检测方法及应用。具体地，本发明的用于检测靶标核酸分子的荧光或裸眼可视化的检测体系，包括：(a)Cas12a蛋白；(b)sgRNA，所述sgRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于靶标核酸分子；和(c)核酸探针，所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号。本发明检测体系和检测方法具有快速、灵敏、高特异、裸眼可视化、适合现场快速检测等优点。
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公开(公告)号：CN111235232A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010060317.X
申请日：2020-01-19
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6844
Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPR-Cas12a系统的可视化快速核酸检测方法及应用。具体地，本发明的用于检测靶标核酸分子的荧光或裸眼可视化的检测体系，包括：(a)Cas12a蛋白；(b)sgRNA，所述sgRNA引导Cas12a蛋白特异性结合于靶标核酸分子；和(c)核酸探针，所述核酸探针含有可检测的标记物，其中当所述核酸探针被Cas12a蛋白旁路切割后，产生可检测信号。本发明检测体系和检测方法具有快速、灵敏、高特异、裸眼可视化、适合现场快速检测等优点。
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