克隆有人肿瘤坏死因子-α(TNF)基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1037009C

    公开(公告)日:1998-01-14

    申请号:CN91103105.7

    申请日:1991-05-17

    Abstract: 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发方法采用基因工程技术,以质粒PIJ486为载体,其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindⅢ双酶切得到的质粒PHT1TNF cDNA片段和质粒PIJ486片段进行连接,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选转化子,提取重组质粒,得到No7转化子,获得了克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌TK54-HT(含有重组质粒PIJT7),将该克隆菌株进行发酵培养,即可获得肿瘤坏死因子蛋白,其表达水平可达1×107单位/升以上,菌种遗传性稳定。

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