克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1165858A

    公开(公告)日:1997-11-26

    申请号:CN96105118.3

    申请日:1996-05-16

    Abstract: 本发明涉及克隆有鲑鱼降钙素(SCT)基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程技术,以质粒PIJ680为载体。其中包括采用PCR(多聚酶反应)扩增技术,分别扩增获得鲑鱼降钙素(SCT)基因和分泌信号肽melc1基因;通过T4DNA连接酶将SCT基因、melc1、基因和PUC19质粒DNA连接,转化至大肠杆菌制备获得SCT-melc1DNA片段;该片段与链霉菌载体质粒PIJ680连接后,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选抗硫链丝菌素的转化子,提取重组质粒,得到重组质粒PMS680,获得了克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌TK54-MS680,(含有重组质粒PMS680),将该克隆菌株进行发酵培养,即可获得高效分泌表达的鲑鱼降钙素,本工程菌遗传性稳定。

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