公开(公告)号：CN1055200A

公开(公告)日：1991-10-09

申请号：CN91103105.7

申请日：1991-05-17

Applicant: 中国医学科学院医药生物技术研究所

Inventor： 李元 ,  刘菊萍 ,  李焕娄 ,  石莲英 ,  刘伯英

IPC: C12N15/09 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明方法采用基因工程技术，以质粒PIJ486为载体，其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindIII双酶切得到的质粒PHTITNFcDNA片段和质粒PIJ486片段进行连接，通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54，挑选转化子，提取重组质粒，得到No7转化子，获得了克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌TK54-HT(含有重组质粒PIJT7)，将该克隆菌株进行发醇培养，即可获得肿瘤坏死因子蛋白，其表达水平可达1×107单位/升以上，菌种遗传性稳定。

公开(公告)号：CN1037009C

公开(公告)日：1998-01-14

申请号：CN91103105.7

申请日：1991-05-17

Applicant: 中国医学科学院医药生物技术研究所

Inventor： 李元 ,  刘菊萍 ,  李焕娄 ,  石莲英 ,  刘伯英

IPC: C12N15/64 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发方法采用基因工程技术，以质粒PIJ486为载体，其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindⅢ双酶切得到的质粒PHT1TNF cDNA片段和质粒PIJ486片段进行连接，通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54，挑选转化子，提取重组质粒，得到No7转化子，获得了克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌TK54-HT(含有重组质粒PIJT7)，将该克隆菌株进行发酵培养，即可获得肿瘤坏死因子蛋白，其表达水平可达1×107单位/升以上，菌种遗传性稳定。