克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1165858A

    公开(公告)日:1997-11-26

    申请号:CN96105118.3

    申请日:1996-05-16

    Abstract: 本发明涉及克隆有鲑鱼降钙素(SCT)基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程技术,以质粒PIJ680为载体。其中包括采用PCR(多聚酶反应)扩增技术,分别扩增获得鲑鱼降钙素(SCT)基因和分泌信号肽melc1基因;通过T4DNA连接酶将SCT基因、melc1、基因和PUC19质粒DNA连接,转化至大肠杆菌制备获得SCT-melc1DNA片段;该片段与链霉菌载体质粒PIJ680连接后,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选抗硫链丝菌素的转化子,提取重组质粒,得到重组质粒PMS680,获得了克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌TK54-MS680,(含有重组质粒PMS680),将该克隆菌株进行发酵培养,即可获得高效分泌表达的鲑鱼降钙素,本工程菌遗传性稳定。

    克隆有人肿瘤坏死因子α(TNF)基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1055200A

    公开(公告)日:1991-10-09

    申请号:CN91103105.7

    申请日:1991-05-17

    Abstract: 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明方法采用基因工程技术,以质粒PIJ486为载体,其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindIII双酶切得到的质粒PHTITNFcDNA片段和质粒PIJ486片段进行连接,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选转化子,提取重组质粒,得到No7转化子,获得了克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌TK54-HT(含有重组质粒PIJT7),将该克隆菌株进行发醇培养,即可获得肿瘤坏死因子蛋白,其表达水平可达1×107单位/升以上,菌种遗传性稳定。

    克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1052507A

    公开(公告)日:1991-06-26

    申请号:CN91100023.2

    申请日:1991-01-09

    Abstract: 本发明涉及微生物领域,特别是克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程方法,其中包括采用质粒PIJ702为载体对生米卡链霉菌总DNA进行鸟枪克隆,转化至变铅青链霉菌TK54,挑选转化子和提取重组质粒,得到№9转化子,将自№9转化子提取得到的№9重组质粒转化至螺旋霉素链霉菌,挑选克隆有№9重组质粒的转化子,得到克隆有丙酰化酶基因的包括№61在内的螺旋霉素链霉菌,将该螺旋霉素链霉菌进行发酵即可工业生产丙酰螺旋霉素,丙酰螺旋霉素在总产物中含量在20%以上,菌种遗传性稳定。

    克隆有人肿瘤坏死因子-α(TNF)基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1037009C

    公开(公告)日:1998-01-14

    申请号:CN91103105.7

    申请日:1991-05-17

    Abstract: 本发明涉及克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发方法采用基因工程技术,以质粒PIJ486为载体,其中包括通过T4-DNA连接酶将分别用EcoRI-HindⅢ双酶切得到的质粒PHT1TNF cDNA片段和质粒PIJ486片段进行连接,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选转化子,提取重组质粒,得到No7转化子,获得了克隆有人肿瘤坏死因子-α基因的变铅青链霉菌TK54-HT(含有重组质粒PIJT7),将该克隆菌株进行发酵培养,即可获得肿瘤坏死因子蛋白,其表达水平可达1×107单位/升以上,菌种遗传性稳定。

    克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1062598C

    公开(公告)日:2001-02-28

    申请号:CN96105118.3

    申请日:1996-05-16

    Abstract: 本发明涉及克隆有鲑鱼降钙素(SCT)基因的变铅青链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程技术,以质粒PIJ680为载体。其中包括采用PCR(多聚酶反应)扩增技术,分别扩增获得鲑鱼降钙素(SCT)基因和分泌信号肽melc1基因;通过T4DNA连接酶将SCT基因、melc1、基因和PUC19质粒DNA连接,转化至大肠杆菌制备获得SCT-melc1DNA片段;该片段与链霉菌载体质粒PIJ680连接后,通过转化使其克隆至变铅青链霉菌TK54,挑选抗硫链丝菌素的转化子,提取重组质粒,得到重组质粒PMS680,获得了克隆有鲑鱼降钙素基因的变铅青链霉菌TK54-MS680,(含有重组质粒PMS680),将该克隆菌株进行发酵培养,即可获得高效分泌表达的鲑鱼降钙素,本工程菌遗传性稳定。

    克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法

    公开(公告)号:CN1037008C

    公开(公告)日:1998-01-14

    申请号:CN91100023.2

    申请日:1991-01-09

    Abstract: 本发明涉及微生物领域,特别是克隆有丙酰化酶基因的螺旋霉素链霉菌的构建方法。本发明采用基因工程方法,其中包括采用质粒RIJ702为载体对生米卡链霉菌总DNA进行鸟枪克隆,转化至变铅青链霉菌TK54,挑选转化子和提取重组质粒,得到NO.9转化子,将自NO.9转化子提取得到的NO.9重组质粒转化至螺旋霉素链霉菌,挑选克隆有NO.9重组质粒的转化子,得到克隆有丙酰化酶基因的包括NO.61在内的螺旋霉素链霉菌。将该螺旋霉素链霉菌进行发酵即可工业生产丙酰螺旋霉素,丙酰螺旋霉素在总产物中含量在20%以上,菌种遗传性稳定。

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