一种基因芯片上的酶标信号检测方法

    公开(公告)号:CN1162552C

    公开(公告)日:2004-08-18

    申请号:CN02115833.9

    申请日:2002-05-14

    Abstract: 本发明公开了一种基因芯片上的酶标信号检测方法,涉及基因芯片信号检测技术领域。其步骤是制作好有关基因芯片;进行芯片生化反应,并在反应过程中引入生物素;芯片生化反应结束后,采用碱性磷酸酶-亲和素复合物或自行制备的碱性磷酸酶-连接肽-链霉结合肽-链霉亲和素复合物进行在片信号检测。在信号检测过程中,对酶标信号检测方法的反应条件进行优化,简化反应步骤,提高了信号检测的稳定性和重复性;通过采用自行制备的碱性磷酸酶-连接肽-链霉结合肽-链霉亲和素定向交联复合物进行信号检测,提高了信号检测灵敏度。本发明适用于中、低密度基因基因芯片的信号检测。

    一种在玻片上检测基因突变的方法

    公开(公告)号:CN1293255A

    公开(公告)日:2001-05-02

    申请号:CN00116095.8

    申请日:2000-10-25

    Abstract: 本发明公开了一种在玻片上检测基因突变的方法,其特征在于将杂交生成的完整异源DNA双链固定在玻片上,异源DNA双链中一条链的5′端与巯基硅烷化的玻片相交联,双链的5′端携带生物素,用羟胺溶液修饰错配碱基中的胞嘧啶,用高锰酸钾和氯化四乙胺混合液修饰错配碱基中的胞嘧啶,用哌啶剪切点突变中的被修饰嘧啶类碱基,加入2到5个单位的S1酸酶消化处理异源DNA双链,连人大肠杆菌碱性磷酸酶进行突变检测。本发明不仅能够在玻片上准确、灵敏、快速的检测结核杆菌耐药性基因点突变,而且检测DNA序列长度范围大,成本低廉,操作简便。

    一种控制固定化酶空间取向的方法

    公开(公告)号:CN1292417A

    公开(公告)日:2001-04-25

    申请号:CN00115952.6

    申请日:2000-08-11

    Abstract: 本发明公开了一种控制固定化酶空间取向的方法。其步骤是通过基因操纵构建和表达酶—连接肽—链霉结合肽融合蛋白,制备融合蛋白纯品,超滤浓缩,测定酶动力学;通过链霉结合肽与链霉亲和素的专一性结合,使酶分子定向固定在经链霉亲和素包被的固相载体上,其活性中心朝向反应溶液。融合蛋白为“锚—链”分子系统,其中链霉结合肽为“锚”,控制酶分子固定的方向,连接肽为“链”,能增加酶与链霉结合肽之间的分子距离,既保持两者各自空间活动的灵活性,又减小了链霉结合肽与链霉亲和素的结合反应的空间位阻,从而大大提高定向固定效率。该方法剩余酶活高,均一性好,是定向固定酶分子的一种模式方法,适合于制作高质量生物传感器、生物芯片等生物器件。

    一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用

    公开(公告)号:CN105624178A

    公开(公告)日:2016-06-01

    申请号:CN201410605792.5

    申请日:2014-10-31

    Abstract: 本发明为一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用,以光敏色素荧光蛋白iRFP为模板,在氨基酸97-98位将其拆分为不发荧光的氮端和碳端片段iRN97和iRC98,当这两个片段分别与相互作用的蛋白对相融合表达时,不发荧光的两个片段就可以被拉近而产生iRFP的荧光;iRN97和iRC98分别与艾滋病毒整合酶IN及细胞蛋白P75相融合表达,通过iRN97和iRC98的荧光互补,在活细胞内对IN与p75的相互作用进行研究,当药物能够抑制该蛋白-蛋白之间的相互作用时,iRN97和iRC98则不能被拉近,从而抑制荧光的恢复。该新系统为一种简单、有效、方便的抑制蛋白相互作用的药物的评价系统。

    猴病毒40衣壳蛋白VP1在作为细胞穿膜蛋白中的应用

    公开(公告)号:CN105622732A

    公开(公告)日:2016-06-01

    申请号:CN201410603949.0

    申请日:2014-10-30

    Abstract: 本发明公开了猴病毒40衣壳蛋白VP1在作为细胞穿膜蛋白中的应用。首先揭示了VP1是一种细胞穿透蛋白,将VP1蛋白与其他蛋白融合表达,VP1可以携带外源蛋白穿透细胞膜,进入细胞并定位于细胞质。本发明实验证实VP1蛋白可携带mCherry荧光蛋白及抑癌蛋白P53穿透细胞膜,进入细胞并定位于细胞质。本发明提供了一种简单高效的细胞转导系统,并且实现了在细胞质中的亚细胞定位,所构建的VP1-P53蛋白还有望在肿瘤治疗等方面有潜在应用。

    一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法

    公开(公告)号:CN102220433B

    公开(公告)日:2013-04-24

    申请号:CN201110132346.3

    申请日:2011-05-20

    Abstract: 本发明公开了一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法,步骤是:A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板;B、设计PCR引物,扩增全长的新德里β-内酰胺酶基因;C、浓缩扩增的blaNDM-1基因片段并定量;D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达blaNDM-1酶;F、测定表达的新德里β-内酰胺酶(NDM-1)降解抗生素的活性。在于使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。同时公开了扩增全长blaNDM-1基因又适合小麦胚芽无细胞表达系统表达NDM-1的引物序列。方法易行,本发明能快速检测,灵敏度高,操作简便,使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。

    一种微RNA功能的双荧光报告系统的制备方法及应用

    公开(公告)号:CN102443595B

    公开(公告)日:2013-01-23

    申请号:CN201110357357.1

    申请日:2011-11-11

    Abstract: 本发明公开了一种检测微RNA功能的双荧光报告系统的制备方法及应用,其制备步骤:A、PCR扩增获得mCherry基因序列,插入pEGFP-C1载体替代其EGFP序列,构建成载体pmCherry-C1;B、以RNAi-ReadypSIREN-RetroQ质粒为模板,PCR扩增获得人U6启动子基因,插入载体pmCherry-C1,获得质粒phU6-mCherry-C1;C、PCR扩增获得pAdtrack-CMV质粒上358-1944区间的基因序列,其中带有CMV启动子和EGFP表达框序列,将该序列插入质粒phU6-mCherry-C1中,获得质粒pMGhU6。该pMGhU6质粒即为同时含有mCherry报告基因、内参照EGFP、及微RNA和其靶标序列插入位点的双荧光报告系统。该报告系统可用于微RNA对其靶标序列表达抑制功能检测。检测方法易行,操作简便,只需转染一个质粒既可实现微RNA的功能检测。。借助荧光显微成像,该系统还可以用于可视化检测单个活细胞内微RNA对其靶标的抑制功能。

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