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公开(公告)号：CN102191213B
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201110093484.5
申请日：2011-04-14
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明一种萤火虫荧光素酶的编码基因及制备方法和应用，包括步骤：1. 突变酶突变位点的引入：2．鉴定重组质粒；3．测序，获得带有1060位突变位点的PCR片段；4．经胶回收纯化后，用限制性内切酶，获得大肠杆菌；5．鉴定重组质粒，得到一种分离的蛋白基因；6．培养大肠杆菌；7．将重组质粒转化BL21感受态细胞，得到表达突变酶的菌株；8．将上述获得的BL21表达菌株培养；9．将5蛋白的菌液离心，再通过超声破碎，离心获取上清；10．测定，获得有高热稳定性又有高酶活的萤火虫荧光素酶。一种萤火虫荧光素酶的基因在食品、医药、菌体检测上的应用。该突变酶的发光强度是野生型的15-20倍左右，并且较野生型具有良好的热稳定性。
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公开(公告)号：CN102220433A
公开(公告)日：2011-10-19
申请号：CN201110132346.3
申请日：2011-05-20
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法，步骤是：A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板；B、设计PCR引物，扩增全长的新德里β-内酰胺酶基因；C、浓缩扩增的blaNDM-1基因片段并定量；D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达blaNDM-1酶；E、测定表达的新德里β-内酰胺酶（NDM-1）降解抗生素的活性。在于使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。同时公开了扩增全长blaNDM-1基因又适合小麦胚芽无细胞表达系统表达NDM-1的引物序列。方法易行，本发明能快速检测，灵敏度高，操作简便，使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。
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公开(公告)号：CN102220433B
公开(公告)日：2013-04-24
申请号：CN201110132346.3
申请日：2011-05-20
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法，步骤是：A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板；B、设计PCR引物，扩增全长的新德里β-内酰胺酶基因；C、浓缩扩增的blaNDM-1基因片段并定量；D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达blaNDM-1酶；F、测定表达的新德里β-内酰胺酶（NDM-1）降解抗生素的活性。在于使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。同时公开了扩增全长blaNDM-1基因又适合小麦胚芽无细胞表达系统表达NDM-1的引物序列。方法易行，本发明能快速检测，灵敏度高，操作简便，使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。
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公开(公告)号：CN102191213A
公开(公告)日：2011-09-21
申请号：CN201110093484.5
申请日：2011-04-14
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明一种萤火虫荧光素酶的编码基因及制备方法和应用，包括步骤：1.突变酶突变位点的引入：2．鉴定重组质粒；3．测序，获得带有1060位突变位点的PCR片段；4．经胶回收纯化后，用限制性内切酶，获得大肠杆菌；5．鉴定重组质粒，得到一种分离的蛋白基因；6．培养大肠杆菌；7．将重组质粒转化BL21感受态细胞，得到表达突变酶的菌株；8．将上述获得的BL21表达菌株培养；9．将5蛋白的菌液离心，再通过超声破碎，离心获取上清；10．测定，获得有高热稳定性又有高酶活的萤火虫荧光素酶。一种萤火虫荧光素酶的基因在食品、医药、菌体检测上的应用。该突变酶的发光强度是野生型的15-20倍左右，并且较野生型具有良好的热稳定性。
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