公开(公告)号：CN105622732A

公开(公告)日：2016-06-01

申请号：CN201410603949.0

申请日：2014-10-30

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 崔宗强 ,  张先恩 ,  林秀萍 ,  张治平 ,  高丁

IPC: C07K14/025 ,  C07K19/00 ,  C12N15/37

Abstract: 本发明公开了猴病毒40衣壳蛋白VP1在作为细胞穿膜蛋白中的应用。首先揭示了VP1是一种细胞穿透蛋白，将VP1蛋白与其他蛋白融合表达，VP1可以携带外源蛋白穿透细胞膜，进入细胞并定位于细胞质。本发明实验证实VP1蛋白可携带mCherry荧光蛋白及抑癌蛋白P53穿透细胞膜，进入细胞并定位于细胞质。本发明提供了一种简单高效的细胞转导系统，并且实现了在细胞质中的亚细胞定位，所构建的VP1-P53蛋白还有望在肿瘤治疗等方面有潜在应用。

公开(公告)号：CN103122347B

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201310043837.X

申请日：2013-02-01

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 危宏平 ,  杨航 ,  张云 ,  余军平 ,  张先恩

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  A01N63/00 ,  A01P1/00 ,  A61K38/51 ,  A61P31/04 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/66 ,  C12Q1/527 ,  C12Q1/14 ,  C12R1/445

Abstract: 本发明公开了一种能杀灭葡萄球菌的裂解酶及其应用，同时公开了该酶的氨基酸序列和编码基因序列；采用公开的编码基因所构建的重组裂解酶能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶表达；该酶能用于在体外高效杀灭各种葡萄球菌，包括临床分离的甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）和甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA），以及用于体内治疗葡萄球菌感染的抗生素；所公开的酶也能快速裂解葡萄球菌的细胞壁并释放胞内的物质，如三磷酸腺苷（ATP）和DNA等，通过检测所释放的物质可以实现对葡萄球菌的各种检测。

公开(公告)号：CN103884847A

公开(公告)日：2014-06-25

申请号：CN201410095163.2

申请日：2014-03-14

Applicant: 中国科学院生物物理研究所 ,  上海交通大学 ,  中国科学院武汉病毒研究所 ,  广东体必康生物科技有限公司

Inventor： 张先恩 ,  陶生策 ,  毕利军 ,  邓教宇 ,  张治平 ,  江何伟 ,  周盈 ,  谷晶 ,  郭书娟 ,  张鸿泰 ,  王绪德 ,  邓瑞萍 ,  王宗秀 ,  刘钟慧 ,  顾佳 ,  李阳 ,  李文娟

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/6803 ,  G01N33/5695

Abstract: 本发明公开了一种结核分枝杆菌全蛋白质芯片及应用。本发明提供的一种有如下1）-7）中至少一种功能的蛋白芯片，所述蛋白芯片上连有如下4168种蛋白，且每种蛋白单独成立一个检测点；本发明的实验证明，本发明提供了一种结核分枝杆菌全蛋白质芯片，由基片和包含95%以上的结核分枝杆菌基因组编码的蛋白质组成。该全蛋白质芯片在寻找血清生物标识物、与小分子化合物c-di-GMP相互作用底物，与蛋白质激酶的相互作用的激酶底物，与巨噬细胞相互作用的底物都有明显的意义。本发明相对现有的研究手段具备全局性、高通量的筛选特点，简化了研究设计及操作过程，显著提高研究效率。

公开(公告)号：CN102220433B

公开(公告)日：2013-04-24

申请号：CN201110132346.3

申请日：2011-05-20

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 危宏平 ,  周满 ,  赵金凤 ,  张治平 ,  张先恩

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/34 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明公开了一种细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶的快速检测方法，步骤是：A、裂解或提取测试菌中的DNA用于PCR反应的模板；B、设计PCR引物，扩增全长的新德里β-内酰胺酶基因；C、浓缩扩增的blaNDM-1基因片段并定量；D、采用小麦胚芽无细胞表达系统表达blaNDM-1酶；F、测定表达的新德里β-内酰胺酶（NDM-1）降解抗生素的活性。在于使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。同时公开了扩增全长blaNDM-1基因又适合小麦胚芽无细胞表达系统表达NDM-1的引物序列。方法易行，本发明能快速检测，灵敏度高，操作简便，使用一对PCR引物和测定降解抗生素的活性来达到检测和表征细菌中耐药基因新德里β-内酰胺酶。

公开(公告)号：CN102443595B

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201110357357.1

申请日：2011-11-11

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 崔宗强 ,  尤祥宇 ,  张先恩 ,  张治平

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种检测微RNA功能的双荧光报告系统的制备方法及应用，其制备步骤：A、PCR扩增获得mCherry基因序列，插入pEGFP-C1载体替代其EGFP序列，构建成载体pmCherry-C1；B、以RNAi-ReadypSIREN-RetroQ质粒为模板，PCR扩增获得人U6启动子基因，插入载体pmCherry-C1，获得质粒phU6-mCherry-C1；C、PCR扩增获得pAdtrack-CMV质粒上358-1944区间的基因序列，其中带有CMV启动子和EGFP表达框序列，将该序列插入质粒phU6-mCherry-C1中，获得质粒pMGhU6。该pMGhU6质粒即为同时含有mCherry报告基因、内参照EGFP、及微RNA和其靶标序列插入位点的双荧光报告系统。该报告系统可用于微RNA对其靶标序列表达抑制功能检测。检测方法易行，操作简便，只需转染一个质粒既可实现微RNA的功能检测。。借助荧光显微成像，该系统还可以用于可视化检测单个活细胞内微RNA对其靶标的抑制功能。

公开(公告)号：CN101624568B

公开(公告)日：2012-09-19

申请号：CN200910063483.9

申请日：2009-08-07

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 危宏平 ,  冷艳 ,  张先恩 ,  张治平 ,  门冬 ,  尤祥宇

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12P21/02 ,  C12Q1/00 ,  G01N21/64 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种纳米分子生物传感器及其制备方法。该传感器的主要特点是采用成线蛋白质将分子生物传感器自组装成纳米分子传感器，与未组装的分子生物传感器比较，极大地提高了检测灵敏度。其制备利用蛋白质融合技术，将具有自组装功能的成纳米线蛋白与作为生物识别元件的特定酶分子和作为换能器元件的荧光蛋白融合在一起，得到一种同时具有自组装成纳米线、识别和换能输出信号的功能蛋白，该功能蛋白质经表达纯化后，自组装成纳米分子生物传感器，可以用于检测各种临床、环境样品中的目标分子。本发明同时公开了使用该方法制备的纳米分子生物传感器在检测农药甲基对硫磷中的应用。

公开(公告)号：CN101838634B

公开(公告)日：2012-04-25

申请号：CN201010187107.3

申请日：2010-05-25

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 张先恩 ,  周亚凤 ,  王晓英 ,  张治平 ,  王殿冰 ,  危宏平 ,  崔宗强

IPC: C12N9/20 ,  C12N15/57 ,  C14C5/00

Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌脂肪酶及制备方法和应用，一种枯草芽孢杆菌脂肪酶，大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET28a-Lip A f12-C2(R33W/L140F)，CCTCC NO：M2010057。这种高活力脂肪酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：第一是通过PCR扩增出枯草芽孢杆菌脂肪酶Lip A结构基因；第二是设计二对诱变引物，通过重叠PCR法将两个突变位点依次引入脂肪酶Lip A基因；第三获得高活力脂肪酶产生菌BL21(DE3)/Lip A(R33W/L140F)；第四是在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白；第五是纯化蛋白。一种枯草芽孢杆菌脂肪酶在皮革加工中的应用。本发明方法易行，成本低廉，高酶活脂肪酶突变株蛋白在食品、化工和医药等行业具有重要应用价值。

公开(公告)号：CN102191213A

公开(公告)日：2011-09-21

申请号：CN201110093484.5

申请日：2011-04-14

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 危宏平 ,  赵金凤 ,  王殿冰 ,  张治平 ,  张先恩

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/53 ,  C12N9/02 ,  C12Q1/66 ,  C12Q1/06 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明一种萤火虫荧光素酶的编码基因及制备方法和应用，包括步骤：1.突变酶突变位点的引入：2．鉴定重组质粒；3．测序，获得带有1060位突变位点的PCR片段；4．经胶回收纯化后，用限制性内切酶，获得大肠杆菌；5．鉴定重组质粒，得到一种分离的蛋白基因；6．培养大肠杆菌；7．将重组质粒转化BL21感受态细胞，得到表达突变酶的菌株；8．将上述获得的BL21表达菌株培养；9．将5蛋白的菌液离心，再通过超声破碎，离心获取上清；10．测定，获得有高热稳定性又有高酶活的萤火虫荧光素酶。一种萤火虫荧光素酶的基因在食品、医药、菌体检测上的应用。该突变酶的发光强度是野生型的15-20倍左右，并且较野生型具有良好的热稳定性。

公开(公告)号：CN101348794B

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN200710052783.8

申请日：2007-07-19

Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 周亚凤 ,  张先恩 ,  刘丹 ,  郭永超 ,  张治平

IPC: C12N15/53 ,  C12N9/04 ,  C12N1/21 ,  C12G3/02 ,  A23F3/00 ,  A23L3/3463 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种高活力葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设计两对诱变引物；第二是获得大肠杆菌菌株DH5α/GOD-D401N/A574V；第三是鉴定重组质粒pPIC9kGOD-D401N/A574V；第四是培养大肠杆菌菌株DH5α/GOD-D401N/A574V；第五是得到含突变基因的线性DNA；第六是获得毕赤酵母菌株GS115/GOD-D401N/A574V；第七是诱导纯化获得目的蛋白。本发明方法易行，成本低廉，高酶活葡萄糖氧化酶突变株蛋白在食品糖类检测和保鲜中的应用，具有很高的实用价值。

公开(公告)号：CN101744645A

公开(公告)日：2010-06-23

申请号：CN200810240365.6

申请日：2008-12-17

Applicant: 中国科学院生物物理研究所 ,  中国科学院武汉病毒研究所

Inventor： 乐加昌 ,  陶宁 ,  张先恩 ,  李峰

IPC: A61B17/00 ,  A61K9/00 ,  A61M31/00

Abstract: 本发明从纳米生物机器人的角度，构建分子马达驱动的，以血栓抗体为导向的辅助快速溶栓的纳米机器人，通过分子马达在血栓局部的快速旋转，产生类似于微动力搅拌器的效应，并采用光驱动分子马达，实现纳米生物机器人的可调控性，加快药物与纤维蛋白的接触，实现纳米生物机器人的生物机械力学效应与药物酶解作用的协同，加速纤维蛋白溶解。