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公开(公告)号：CN101857856A
公开(公告)日：2010-10-13
申请号：CN201010187108.8
申请日：2010-05-25
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌脂肪酶及制备方法和应用，一种枯草芽孢杆菌脂肪酶，大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET28a-/Lip A f10-H1(I12V/L140F/D144E)，CCTCC NO：M2010058。这种高活力脂肪酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：第一是通过PCR扩增出枯草芽孢杆菌脂肪酶Lip A结构基因；第二是设计3对诱变引物，通过重叠PCR将突变引入脂肪酶Lip A基因；第三获得高活力脂肪酶产生菌BL21(DE3)/Lip A(I12V/L140F/D144E)；第四是在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白；第五是纯化蛋白。一种枯草芽孢杆菌脂肪酶在洗涤剂工业中的应用。本发明方法易行，成本低廉，高酶活脂肪酶突变株蛋白在食品、能源、化工和医药等行业具有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN101838634A
公开(公告)日：2010-09-22
申请号：CN201010187107.3
申请日：2010-05-25
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌脂肪酶及制备方法和应用，一种枯草芽孢杆菌脂肪酶，大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET28a-Lip A f12-C2(R33W/L140F)，CCTCC NO：M2010057。这种高活力脂肪酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：第一是通过PCR扩增出枯草芽孢杆菌脂肪酶Lip A结构基因；第二是设计二对诱变引物，通过重叠PCR法将两个突变位点依次引入脂肪酶Lip A基因；第三获得高活力脂肪酶产生菌BL21(DE3)/Lip A(R33W/L140F)；第四是在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白；第五是纯化蛋白。一种枯草芽孢杆菌脂肪酶在皮革加工中的应用。本发明方法易行，成本低廉，高酶活脂肪酶突变株蛋白在食品、化工和医药等行业具有重要应用价值。
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公开(公告)号：CN101348795A
公开(公告)日：2009-01-21
申请号：CN200710052784.2
申请日：2007-07-19
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设计一对诱变引物；第二是获得大肠杆菌菌株DH5α/GOD－A137S；第三是鉴定重组质粒pPIC9kGOD－A137S；第四是培养大肠杆菌菌株DH5α/GOD－A137S；第五是得到含突变基因的线性DNA；第六是获得毕赤酵母菌株GS115/GOD－A137S；第七是诱导纯化获得目的蛋白。本发明方法易行，成本低廉，高酶活葡萄糖氧化酶突变株蛋白在食品糖类检测和保鲜中的应用，具有很高的实用价值。
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公开(公告)号：CN1710100A
公开(公告)日：2005-12-21
申请号：CN200510018969.2
申请日：2005-06-23
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法。其步骤是：首先是探针的设计；其次是探针的退火；第三是探针的固定；第四是提取含有AhR和ARNT受体蛋白的SD小鼠肝脏胞液；第五是将SD小鼠肝脏细胞液与含有二恶英类化学物质待测样品混合；第六是FITC的荧光检测。根据荧光值增加的多少来确定样品中二恶英类化学物质的含量。本发明能快速准确的检测二恶英类化学物质，检测成本低，应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN101838634B
公开(公告)日：2012-04-25
申请号：CN201010187107.3
申请日：2010-05-25
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌脂肪酶及制备方法和应用，一种枯草芽孢杆菌脂肪酶，大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET28a-Lip A f12-C2(R33W/L140F)，CCTCC NO：M2010057。这种高活力脂肪酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：第一是通过PCR扩增出枯草芽孢杆菌脂肪酶Lip A结构基因；第二是设计二对诱变引物，通过重叠PCR法将两个突变位点依次引入脂肪酶Lip A基因；第三获得高活力脂肪酶产生菌BL21(DE3)/Lip A(R33W/L140F)；第四是在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的蛋白；第五是纯化蛋白。一种枯草芽孢杆菌脂肪酶在皮革加工中的应用。本发明方法易行，成本低廉，高酶活脂肪酶突变株蛋白在食品、化工和医药等行业具有重要应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101348794B
公开(公告)日：2010-10-06
申请号：CN200710052783.8
申请日：2007-07-19
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种高活力葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设计两对诱变引物；第二是获得大肠杆菌菌株DH5α/GOD-D401N/A574V；第三是鉴定重组质粒pPIC9kGOD-D401N/A574V；第四是培养大肠杆菌菌株DH5α/GOD-D401N/A574V；第五是得到含突变基因的线性DNA；第六是获得毕赤酵母菌株GS115/GOD-D401N/A574V；第七是诱导纯化获得目的蛋白。本发明方法易行，成本低廉，高酶活葡萄糖氧化酶突变株蛋白在食品糖类检测和保鲜中的应用，具有很高的实用价值。
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公开(公告)号：CN1731150B
公开(公告)日：2010-04-28
申请号：CN200510019330.6
申请日：2005-08-23
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种利用生物芯片检测二恶英类化学物质的方法。其步骤是：首先，在玻片上固定末端Cy5荧光标记的含DRE序列的探针，加入从小鼠肝细胞提取的胞液与2，3，7，8-TCDD的混合液，则胞液中含有的AhR/ARNT蛋白可与DRE序列结合，再加入T7核酸外切酶，由于AhR/ARNT蛋白与DRE序列的结合阻碍了T7核酸外切酶对末端Cy5标记的单核苷酸的消化，使得2，3，7，8-TCDD的含量与荧光强度呈正相关，最后检测Cy5荧光分子的荧光值，根据荧光值的多少来确定样品中二恶英类化学物质的含量。本发明能快速准确的检测二恶英，检测成本低。
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公开(公告)号：CN101348794A
公开(公告)日：2009-01-21
申请号：CN200710052783.8
申请日：2007-07-19
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种高活力葡萄糖氧化酶突变体编码基因及制备方法和应用。这种高活力葡萄糖氧化酶突变体的编码基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的蛋白具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，其步骤是：首先设计两对诱变引物；第二是获得大肠杆菌菌株DH5α/GOD－D401N/A574V；第三是鉴定重组质粒pPIC9kGOD－D401N/A574V；第四是培养大肠杆菌菌株DH5α/GOD－－D401N/A574V；第五是得到含突变基因的线性DNA；第六是获得毕赤酵母菌株GS115/GOD－D401N/A574V；第七是诱导纯化获得目的蛋白。本发明方法易行，成本低廉，高酶活葡萄糖氧化酶突变株蛋白在食品糖类检测和保鲜中的应用，具有很高的实用价值。
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公开(公告)号：CN100386628C
公开(公告)日：2008-05-07
申请号：CN200610018858.6
申请日：2006-04-21
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , C12Q1/02
Abstract: 本发明公开了一种噬菌体免疫PCR检测病原的方法，其步骤是首先把特异识别病原的单克隆抗体包被于酶标板上捕获样品中的病原抗原，然后加入特异识别病原抗原的重组噬菌体，洗涤后结合到样品上的噬菌体作为模板进行PCR反应，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，通过进行实时定量PCR对样品中的病原进行定量。本方法检测病原简单灵敏且成本低廉，适用于病原感染的实验室诊断和血清流行病学调查。
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公开(公告)号：CN100999759A
公开(公告)日：2007-07-18
申请号：CN200610094930.3
申请日：2006-06-21
Applicant: 中国科学院武汉病毒研究所
Abstract: 本发明公开了一种基于大肠杆菌碱性磷酸酶的蛋白激酶检测的方法。根据大肠杆菌碱性磷酸酶活性中心的结构特征，设计并构建大肠杆菌碱性磷酸酶突变体，屏蔽其催化能力，保留和磷酸化底物结合的能力，使其成为一种磷酸化蛋白(短肽)通用结合物。将磷酸化蛋白通用结合物固定在BIAcore3000传感器芯片上，加入蛋白激酶短肽底物和激酶反应后形成的磷酸化短肽，通过BIAcore3000传感器的响应信号来鉴定激酶的种类和含量。该方法利用磷酸化蛋白(短肽)通用结合物取代抗体发展蛋白激酶检测新方法，可避免荧光抗体检测方法中特异性磷酸化抗体的难获得性等瓶颈问题，具有很好的应用前景。
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