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公开(公告)号：CN108359630A
公开(公告)日：2018-08-03
申请号：CN201810324073.4
申请日：2018-04-12
Applicant: 南开大学
Abstract: 一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用。构建方法是，将铜绿假单胞菌Δ8菌株中参与细胞壁肽聚糖合成的谷氨酸消旋酶基因murI删除，从而获得D-谷氨酸营养缺陷型菌株Δ9。其应用是，Δ9菌株无细胞毒性并保留有完好的III型分泌系统(T3SS)，可将外源蛋白质通过其T3SS高效地注入到哺乳动物细胞中，能够应用于哺乳动物细胞蛋白质转染。Δ9在缺少D-谷氨酸的培养环境中无法生长，因此，转染后该菌可通过D-谷氨酸营养限制自行清除。我们分别利用HeLa细胞和小鼠感染模型阐释了该菌体外和体内应用的安全性。本发明对于开发安全、高效的哺乳动物细胞蛋白质转染技术有着积极的意义。
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公开(公告)号：CN107099495A
公开(公告)日：2017-08-29
申请号：CN201710242405.X
申请日：2017-04-14
Applicant: 南开大学
Abstract: 本发明涉及一种用于哺乳动物细胞蛋白质递送的基因工程菌株的构建方法及其应用。构建方法是，将铜绿假单胞菌PAK菌株基因组中4种毒力因子exoS,exoT,exoY,ndk基因删除，使其对哺乳动物细胞无细胞毒性；进一步从染色体上删除抑制细菌III型分泌系统(T3SS)的popN基因，使其T3SS介导的蛋白质注入量显著提高，从而构建出工程菌株Δ5。本发明构建的工程菌株Δ5可用于对多种哺乳动物细胞系实施蛋白质递送，进行基因编辑，细胞重编程，蛋白质功能研究等工作。可实施递送的细胞类型广泛，包括人和鼠的皮肤细胞、肌细胞、肠道细胞、肝细胞、多能干细胞等。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103709253A
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201310737044.8
申请日：2013-12-20
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种生物合成分离制备胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其类似物(KGLP-1)的新方法。本发明采用基因工程技术，分别构建了表达谷胱甘肽硫转移酶标签(GST)的GST-GLP-1及GST-KGLP-1融合蛋白的基因工程大肠杆菌，并在融合蛋白中创新性的引进了肠激酶酶切位点。经诱导表达的融合蛋白可通过谷胱甘肽亲和层析，肠激酶酶切和超滤获得GLP-1和KGLP-1的纯品。本发明所制备的GLP-1及其类似物能够有效的结合GLP-1受体并产生生物活性。本发明提供了一种制备GLP-1及其类似物的简便快捷的生物合成的方法，该方法具有条件温和、产物分离提取方便、工艺步骤简单等优点，有很好的产业化应用前景。
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公开(公告)号：CN102286563B
公开(公告)日：2013-11-06
申请号：CN201110202072.0
申请日：2011-07-19
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种采用固定化酶制备L-鸟氨酸的方法。采用构建的精氨酸酶基因工程菌BL21(DE3)-pET35b-Arg，将其诱导表达，破碎细胞，收集上清液，对精氨酸酶的最适反应条件和固定化条件进行了研究。将自制的纤维素微球载体加入到细胞裂解液中，通过CBD的特异性吸附，实现精氨酸酶的固定化，采用交联剂交联之后，优化催化反应条件，最佳的催化反应条件为，pH8；反应时间2h；底物L-精氨酸浓度，40g/L；固定化酶浓度，2mL/L；Mn2+浓度，1mM。在最适反应条件下，重复使用10次，底物L-精氨酸的转化率均达到90%以上。
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公开(公告)号：CN102703370A
公开(公告)日：2012-10-03
申请号：CN201210177959.3
申请日：2012-06-01
Applicant: 南开大学
Abstract: 一株组成型表达精氨酸酶的基因工程菌株及其应用。通过自杀质粒pRE112构建组成型表达精氨酸酶的基因工程菌菌株E.coliDH5α-ARG，其筛选后获得的高活性菌株酶活力为873U/g，该菌株与实验室保存的诱导型表达的菌株相比，酶活力没有显著性差异。优化的最佳催化反应条件为：反应温度，60℃；pH9.0；Mn2+浓度，0.5mM。最适反应条件下，以2g/L细胞为酶源，当底物L-精氨酸浓度为100g/L时，反应12h，底物L-精氨酸的转化率为98.17%。利用该酶源在该条件下转化10gL-精氨酸可制备L-鸟氨酸7.48g，纯度为98.9%，拆分20gDL-精氨酸可制备L-鸟氨酸7.44g和D-精氨酸9.71g，二者纯度均达98.1%以上。
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公开(公告)号：CN102286563A
公开(公告)日：2011-12-21
申请号：CN201110202072.0
申请日：2011-07-19
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种采用固定化酶制备L-鸟氨酸的方法。采用构建的精氨酸酶基因工程菌BL21(DE3)-pET35b-Arg，将其诱导表达，破碎细胞，收集上清液，对精氨酸酶的最适反应条件和固定化条件进行了研究。将自制的纤维素微球载体加入到细胞裂解液中，通过CBD的特异性吸附，实现精氨酸酶的固定化，采用交联剂交联之后，优化催化反应条件，最佳的催化反应条件为，pH8；反应时间2h；底物L-精氨酸浓度，40g/L；固定化酶浓度，2mL/L；Mn2+浓度，1mM。在最适反应条件下，重复使用10次，底物L-精氨酸的转化率均达到90%以上。
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公开(公告)号：CN101640085B
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN200910069541.9
申请日：2009-07-03
Applicant: 南开大学
Abstract: 一种分离mRNA的纤维素磁性微米材料的制备及应用。本发明采用基因工程技术将浅紫灰链霉菌的链霉亲和素基因定向克隆至含有纤维素结合域标签的pET系列载体，构建了同时具有生物素结合活性和纤维素结合活性的双功能融合蛋白CBD-SA的载体，并转入E.coli BL21感受态菌株，经IPTG低温诱导表达，获得高含量的CBD-SA融合表达蛋白。利用CBD-SA作为生物桥联剂，以生物特异性偶联法代替传统的物理吸附法和化学键合法，使纤维素磁性微米材料活化，活化后能够高效率的结合生物素化的试剂，得到可用于蛋白或核酸分离的磁性微米材料。本发明提供的纤维素磁性微米材料可用于生物样品中mRNA的分离提取等。
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