公开(公告)号：CN102286563B

公开(公告)日：2013-11-06

申请号：CN201110202072.0

申请日：2011-07-19

Applicant: 南开大学

Inventor： 张奇 ,  白钢 ,  侯洁 ,  白芳 ,  李鸣

IPC: C12P13/10 ,  C12P41/00 ,  C12R1/19

Abstract: 一种采用固定化酶制备L-鸟氨酸的方法。采用构建的精氨酸酶基因工程菌BL21(DE3)-pET35b-Arg，将其诱导表达，破碎细胞，收集上清液，对精氨酸酶的最适反应条件和固定化条件进行了研究。将自制的纤维素微球载体加入到细胞裂解液中，通过CBD的特异性吸附，实现精氨酸酶的固定化，采用交联剂交联之后，优化催化反应条件，最佳的催化反应条件为，pH8；反应时间2h；底物L-精氨酸浓度，40g/L；固定化酶浓度，2mL/L；Mn2+浓度，1mM。在最适反应条件下，重复使用10次，底物L-精氨酸的转化率均达到90%以上。

公开(公告)号：CN102703370A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210177959.3

申请日：2012-06-01

Applicant: 南开大学

Inventor： 张奇 ,  杨洁 ,  李鸣 ,  白芳 ,  白钢

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/10 ,  C12R1/19

Abstract: 一株组成型表达精氨酸酶的基因工程菌株及其应用。通过自杀质粒pRE112构建组成型表达精氨酸酶的基因工程菌菌株E.coliDH5α-ARG，其筛选后获得的高活性菌株酶活力为873U/g，该菌株与实验室保存的诱导型表达的菌株相比，酶活力没有显著性差异。优化的最佳催化反应条件为：反应温度，60℃；pH9.0；Mn2+浓度，0.5mM。最适反应条件下，以2g/L细胞为酶源，当底物L-精氨酸浓度为100g/L时，反应12h，底物L-精氨酸的转化率为98.17%。利用该酶源在该条件下转化10gL-精氨酸可制备L-鸟氨酸7.48g，纯度为98.9%，拆分20gDL-精氨酸可制备L-鸟氨酸7.44g和D-精氨酸9.71g，二者纯度均达98.1%以上。

公开(公告)号：CN102286563A

公开(公告)日：2011-12-21

申请号：CN201110202072.0

申请日：2011-07-19

Applicant: 南开大学

Inventor： 张奇 ,  白钢 ,  侯洁 ,  白芳 ,  李鸣

IPC: C12P13/10 ,  C12P41/00 ,  C12R1/19

Abstract: 一种采用固定化酶制备L-鸟氨酸的方法。采用构建的精氨酸酶基因工程菌BL21(DE3)-pET35b-Arg，将其诱导表达，破碎细胞，收集上清液，对精氨酸酶的最适反应条件和固定化条件进行了研究。将自制的纤维素微球载体加入到细胞裂解液中，通过CBD的特异性吸附，实现精氨酸酶的固定化，采用交联剂交联之后，优化催化反应条件，最佳的催化反应条件为，pH8；反应时间2h；底物L-精氨酸浓度，40g/L；固定化酶浓度，2mL/L；Mn2+浓度，1mM。在最适反应条件下，重复使用10次，底物L-精氨酸的转化率均达到90%以上。